日本同仁化学菌染色キット -Bacstain- CTC Rapid Staining Kit (for Flow cytometry)　

发表于2024年11月10日由上海金畔生物科技有限公司

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-Bacstain- CTC Rapid Staining Kit (for Flow cytometry)

06 細菌研究用試薬

-Bacstain- CTC Rapid Staining Kit (for Flow cytometry)

細菌研究用試薬

菌染色キット

製品コード

BS01　 -Bacstain- CTC Rapid Staining Kit (for Flow cytometry)

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
100 assays	￥23,400	348-91301

キット内容

100 assays	･CTC ･Enhancing reagent A	10 mg x3 100 μl x1

試験成績書

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ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

取扱説明書日本語
取扱説明書 English
プロトコル細菌を蛍光染色したい

技術情報

特長

1)従来のCTC染色に比べ高感度な検出が可能である。
2)少量小分け品であるため、試薬の調製が容易である。

※本品は、福岡県工業技術センター生物食品研究所との共同開発製品である。

※使用方法は、プロトコルをご覧ください。

参考文献

参考文献を表示する

1) A. W. Coleman, "Enhanced Detection of Bacteria in Natural Environments by Fluorochrome Staining of DNA", Limnol. Oceanogr., 1980, 25, 948.
2) E. Severin, J. Stellmach and H. -M. Nachtigal, "Fluorimetric Assay of Redox Activity in Cells", Anal. Chim. Acta, 1985, 170, 341.
3) G. G. Rodriguez, D. Phipps, K. Ishiguro and H. F. Ridgway, "Use of a Fluorescent Redox Probe for Direct Visualization of Actively Respiring Bacteria", Appl. Environ. Microbiol., 1992, 58(6), 1801.
4) G. Schaule, H. C. Flemming and H. F. Ridgway, "Use of 5-Cyano-2,3-ditolyl Tetrazolium Chloride for Quantifying Planktonic and Sessile Respiring Bacteria in Drinking Water", Appl. Environ. Microbiol., 1993, 59(11), 3850.
5) R. A. Bovill, J. A. Shalloross and B. M. Markey, "Comparison of the Fluorescent Redox Dye 5-Cyano-2,3-ditolyltetrazolium Chloride with p-Iodonitrotetrazolium Violet to Detect Metabolic Activity in Heat-stressed Listeria monocytogenes Cells", J. Appl. Bacteriol., 1994, 77(4), 353.
6) M. T. E. Suller and D. Lloyd, "Flow Cytometric Assesment of the Postantibiotic Effect of Methicillin on Staphylococcus aureus", Antimicrob. Agents Chemother., 1998, 42(5), 1195.
7) M. Kawai, N. Yamaguchi and M. Nasu "Rapid Enumeration of Physiologically Active Bacteria in Purified Water Used in the Pharmaceutical Manufacuturing Process", J. Appl. Microbiol., 1999, 86, 496.
8) N. Yamaguchi, M. Sasada, M. Yamanaka and M. Nasu, "Rapid Detection of Respiring Escherichia coli O157:H7 in Apple Juice, Milk and Ground Beef by Flow Cytometry", Cytometry , 2003, 54A, 27.
9) A. Kitaguchi, N. Yamagauchi and M. Nasu, "Enumeration of Respiring Pseudomonas spp. in Milk within 6 Hours by Fluorescence In Situ Hybridization Following Formazan Reduction", Appl. Environ. Microbiol., 2005, 71(5), 2748.
10)A. Hiraishi and N. Yoshida, "An Improved Redox Dye-Staining Method Using 5-Cyano-2,3-Ditoryl Tetrazolium Chloride for Detection of Metabolically Active Bacteria in Activated Sludge", Microbes Environ., 2004, 19(1), 61.
11)平石明, 吉田奈央子, “活性汚泥における培養不能な細菌の検出”, 月刊海洋培養不能細菌 -VNC研究の現状と課題–, 2003, 33, 48．
12)染谷孝, “蛍光染色による土壌微生物の検出法”, 月刊海洋培養不能細菌 –VNC研究の現状と課題–, 2003, 33, 14．

取扱条件

取扱条件
1.危険物第4類　第3石油類　危険等級Ⅲ, 2.医薬用外劇物, 3.火気厳禁 4.保存方法：冷蔵,遮光
法規制毒物および劇物取締法	劇物
危険・有害シンボルマーク

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日本同仁化学比色試薬／金属指示薬 Sodium bicinchoninate　

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Sodium bicinchoninate

15 比色試薬／金属指示薬

Sodium bicinchoninate

比色試薬／金属指示薬

比色試薬／金属指示薬

製品コード

B037　 Sodium bicinchoninate
CAS番号

979-88-4
化学名

4,4′-Dicarboxy-2,2′-biquinoline, disodium salt
分子式・分子量

C₂₀H₁₀N₂Na₂O₄=388.28

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
5 g	￥25,000	343-05521

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技術情報

応用可能な物質
Cu^＋、糖、蛋白質

標準測定法（1）（蛋白量 100～1,200 μg/mL）
[試薬]
溶液 A：Sodium Bicinchoninate(BCA) 1 g, Na₂CO₃・H₂O 2 g, Na₂C₄H₄O₆・2H₂O（酒石酸ナトリウム）0.16 g, NaOH 0.4 g, NaHCO₃ 0.95 gを脱イオン水 95.5 mLに溶解し、NaHCO₃を用いてpH11.25に調整する。
溶液 B：CuSO₄・5H₂O 0.4 gを脱イオン水 9.6 mLに溶解する。
溶液 C：溶液A 50 mL と溶液B 1 mLを混合する。（用時調製）

[操作]
試料あるいは標準の 100 μLと溶液C 2 mLを試験管にとり、混合して37℃で30分間インキュベートし、562 nmの吸光度（試薬ブランク対照）を測定。検量線を作成して、試料中の濃度を決定する。

標準測定法（2）（蛋白量 0.5～10 μg/mL）
[試薬]
溶液 A ：Na₂CO₃・H₂O 8 g, NaOH 1.6 g, Na₂C₄H₄O₆・2H₂O（酒石酸ナトリウム） 1.6 gを脱イオン水 89 mlに溶解し、NaHCO₃を用いて H11.25 に調整する。
溶液 B：Sodium bicinchoninate 4 g を脱イオン水 96 mLに溶解する。
溶液 C：CuSO₄・5H₂O 0.08 gを脱イオン水 2 mLに溶解し、これに溶液B 50 mLを加え混合する（用時調製）。
溶液 D：溶液A 50 mLと溶液C 50 mLを混合する（用時調製）。

[操作]
試料あるいは標準の1 mLと溶液D 1 mLを試験管に入れ、60℃で60分間インキュベートし、室温にもどした後、562 nm の吸光度（試薬ブランク対照）を測定、検量線を作成して、試料中の濃度を決定する。

比色試薬／金属指示薬 Sodium bicinchoninate　

参考文献

参考文献を表示する

1) K. Ueno and K. Kina, "Colloid Titration – A Rapid Method for the Determination of Charged Colloid", J. Chem. Education, 1985, 62, 627.
2) P. K. Smithm, R. I. Krohn, G. T. Hermanson, A. K. Mallia, F. H. Gartner, M. D. Provenzano, E. K. Fujimoto, N. M. Goeke, B. J. Olson and D. C. Klenk, "Measurement of Protein Using Bicinchoninic Acid", Anal. Biochem., 1985, 150, 76.
3) M. G. Redinbaugh and R. B. Turley, "Adaptation of the Bicinchoninic Acid Protein Assay for Use with Microtiter Plates and Sucrose Gradient Fractions", Anal. Biochem., 1986, 153, 267.
4) 中村洋, "生体高分子－タンパク質・ペプチド－", ぶんせき, 1990, 878.

取扱条件

規格
性状：	本品は、白色～黄色粉末であり水に溶ける。
水溶状：	試験適合
モル吸光係数：	15,500 以上(332 nm 付近)
強熱残分(硫酸塩)：	30.0～40.0％
蛋白定量ブランク：	試験適合
NMRスペクトル：	試験適合

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日本同仁化学比色試薬／金属指示薬 Calcein　

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Calcein

15 比色試薬／金属指示薬

Calcein

比色試薬／金属指示薬

比色試薬／金属指示薬

製品コード

C001　 Calcein
CAS番号

1461-15-0
化学名

Bis[N,N-bis(carboxymethyl)aminomethyl]fluorescein
分子式・分子量

C₃₀H₂₆N₂O₁₃=622.53

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
100 mg	￥2,800	344-00431
1 g	￥4,800	340-00433
5 g	￥13,600	348-00434

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ご購入方法
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技術情報

応用可能な金属

キレート滴定指示薬として：Ba, Ca, Cu, Mg
オートアナライザー比色薬として：Ca
蛍光比色試薬として：Al, Ca, Mg, Zn
生化学用試薬として：ワニの歯の成長測定など

参考文献

参考文献を表示する

1) K. Ueno, T. Imamura and K. L. Cheng, "Handbook of Organic Analitical Reagents 2nd Edition", CRC Press, 1992.
2) 入谷信彦、宮原武恒、高橋一朗, "けい光光度滴定によるクロムの定量", Jpn. Anal., 1968, 17, 1075.
3) R. O. Ashby and M. Roberts, "A Microdetermination of Calcium in Blood Serum", J. Lab. & Clin. Med., 1957, 49, 958.
4) J. Korbl and F. Vydra, "Metallochromic Indicators. IV. A Note on the Preparation and Properties of Calcein", Collect. Czech. Chem. Commun., 1958, 23, 622.
5) 宮原武恒, "銅(II)-カルセイン錯体の安定度定数の測定", 分析化学, 1977, 26, 615.
6) M. A. Demertzis, "Fluorimetric Determination of Calcium in Serum with Calcein Complexation of Calcein with Calcium and Alkali Metals", Anal. Chim. Acta, 1988, 209, 303.
7) E. Muller-Ackermann, U. Panne and R. Niessner, "A Fiber Optic Sensor Array for the Fluorimetric Detection of Heavy Metals", Anal. Methods Instrum., 1995, 2(4), 182

取扱条件

規格
性状：	本品は、橙黄色粉末で水にわずかに溶け、アルカリに溶ける。
アルカリ溶状：	試験適合
鋭敏度：	試験適合
遊離フルオレセイン：	試験適合
強熱残分(硫酸塩)：	1.0% 以下
IRスペクトル：	試験適合

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日本同仁化学菌染色キット -Bacstain- CTC Rapid Staining Kit (for Microscopy)　

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–Bacstain– CTC Rapid Staining Kit (for Microscopy)

06 細菌研究用試薬

–Bacstain– CTC Rapid Staining Kit (for Microscopy)

細菌研究用試薬

菌染色キット

製品コード

BS02　 –Bacstain– CTC Rapid Staining Kit (for Microscopy)

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
100 assays	￥22,800	345-91311

キット内容

100 assays	・CTC ・Enhancing Reagent B	10 mg × 3 500 μl × 1

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ご購入方法
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マニュアル

取扱説明書日本語
取扱説明書 English
プロトコル細菌を蛍光染色したい

技術情報

キット以外に必要なもの

・20 μL, 1000 μLマイクロピペット　・インキュベーター　
・蛍光顕微鏡（blue excitation filter, red emission filter)

参考文献

参考文献を表示する

1) A. W. Coleman, "Enhanced Detection of Bacteria in Natural Environments by Fluorochrome Staining of DNA", Limnol. Oceanogr., 1980, 25, 948.
2) E. Severin, J. Stellmach and H. -M. Nachtigal, "Fluorimetric Assay of Redox Activity in Cells", Anal. Chim. Acta, 1985, 170, 341.
3) G. G. Rodriguez, D. Phipps, K. Ishiguro and H. F. Ridgway, "Use of a Fluorescent Redox Probe for Direct Visualization of Actively Respiring Bacteria", Appl. Environ. Microbiol., 1992, 58(6), 1801.
4) G. Schaule, H. C. Flemming and H. F. Ridgway, "Use of 5-Cyano-2,3-ditolyl Tetrazolium Chloride for Quantifying Planktonic and Sessile Respiring Bacteria in Drinking Water", Appl. Environ. Microbiol., 1993, 59(11), 3850.
5) R. A. Bovill, J. A. Shalloross and B. M. Markey, "Comparison of the Fluorescent Redox Dye 5-Cyano-2,3-ditolyltetrazolium Chloride with p-Iodonitrotetrazolium Violet to Detect Metabolic Activity in Heat-stressed Listeria monocytogenes Cells", J. Appl. Bacteriol., 1994, 77(4), 353.
6) M. T. E. Suller and D. Lloyd, "Flow Cytometric Assesment of the Postantibiotic Effect of Methicillin on Staphylococcus aureus", Antimicrob. Agents Chemother., 1998, 42(5), 1195.
7) M. Kawai, N. Yamaguchi and M. Nasu "Rapid Enumeration of Physiologically Active Bacteria in Purified Water Used in the Pharmaceutical Manufacuturing Process", J. Appl. Microbiol., 1999, 86, 496.
8) N. Yamaguchi, M. Sasada, M. Yamanaka and M. Nasu, "Rapid Detection of Respiring Escherichia coli O157:H7 in Apple Juice, Milk and Ground Beef by Flow Cytometry", Cytometry, 2003, 54A, 27.
9) A. Kitaguchi, N. Yamagauchi and M. Nasu, "Enumeration of Respiring Pseudomonas spp. in Milk within 6 Hours by Fluorescence In Situ Hybridization Following Formazan Reduction", Appl. Environ. Microbiol., 2005, 71(5), 2748.
10)A. Hiraishi and N. Yoshida, "An Improved Redox Dye-Staining Method Using 5-Cyano-2,3-Ditoryl Tetrazolium Chloride for Detection of Metabolically Active Bacteria in Activated Sludge", Microbes Environ., 2004, 19(1), 61.
11)平石明，吉田奈央子，“活性汚泥における培養不能な細菌の検出”，月刊海洋培養不能細菌 -VNC研究の現状と課題-，2003, 33, 48．
12)染谷孝， “蛍光染色による土壌微生物の検出法”，月刊海洋培養不能細菌 -VNC研究の現状と課題-， 2003, 33, 14．

取扱条件

取扱条件
1.医薬用外劇物, 2.保存方法：冷蔵,遮光
法規制毒物および劇物取締法	劇物

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日本同仁化学比色試薬／金属指示薬 Calcein Blue　

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Calcein Blue

15 比色試薬／金属指示薬

Calcein Blue

比色試薬／金属指示薬

比色試薬／金属指示薬

製品コード

C002　 Calcein Blue
CAS番号

54375-47-2
化学名

8-[N,N-Bis(carboxymethyl)aminomethyl]-4-methylumbelliferone
分子式・分子量

C₁₅H₁₅NO₇=321.28

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 g	￥7,600	347-00443

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技術情報

応用可能な金属

キレート滴定金属指示薬として：
<酸性> Co, Cu, Mn, Ni <アルカリ性> Ba, Ca, Sr
蛍光光高度滴定試薬として：Cr
蛍光比色試薬として：Fe, Zr, F^－（蛍光消光分析）

参考文献

参考文献を表示する

1) D. H. Willkins, "Calcein Blue – A New Metalfluorechromic Indicator for Chelatometric Titrations", Talanta, 1960, 4, 182.
2) J. H. Eggers, "Umbellikomplexon Und Xanthokomplexonein Beitrag zur Kenntnnis Komplexometrischer Fluoreszensindikatoren", Talanta, 1960, 4, 38.
3) H. N. Elsheimer, "Complexometric Determination of Gallium with Calcein Blue as Indicator", Talanta, 1967, 14, 97.
4) M. A. Salam Khan, E. F. Mooney and W. I. Stephen, "A Structural Study of the Methyleneiminodiacetic Acid Derivatives of Some 7-Hydroxycoumarins", Anal. Chim. Acta, 1968, 43, 453.
5) 入谷信彦, 宮原武恒, 高橋一郎, "けい光光度滴定によるクロムの定量", Jpn. Anal., 1968, 17, 1075.
6) R. V. Hems, G. F. Kirkbright and T. S. West, "Spectrofluorimetric Determination of Submicrogram Amounts of Zirconium with Calcein Blue", Anal. Chem., 1970, 42, 784.
7) T. L. Har and T. S. West, "Spectrofluorimetric Determination of Traces of Fluoride Ion by Ternary Complex Formation with Zirconium and Calcein Blue", Anal. Chem., 1971, 43, 136.
8) T. Imasaka, T. Ogawa and N. Ishibashi, "Characteristics of Coordination Compounds of Calcein Blue for a Tunable Oraganic Liquid Laser", Bull. Chem. Soc. Jpn., 1976, 49, 2687.
9) 宮原武恒, "銅(II)-カルセインブルー錯体の安定度定数", 分析化学, 1980, 29, 11.
10) K. A. Matsoukas, N. P. Evmiridis and M. A. Demertzis, "Spectrofluorimetric Determination of Magnesium in Blood Serum with Calcein Blue", Anal. Chim. Acta, 1989, 227, 211.

取扱条件

規格
性状：	本品は、白色～淡黄色粉末でありアルカリに溶ける。
アルカリ溶状：	試験適合
鋭敏度：	試験適合
強熱残分(硫酸塩)：	0.50% 以下
IRスペクトル：	試験適合

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日本同仁化学DAPI/PI で菌を二重染色 -Bacstain- Bacterial Viability Detection Kit – DAPI/PI　

发表于2024年11月10日由上海金畔生物科技有限公司

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–Bacstain– Bacterial Viability Detection Kit – DAPI/PI

06 細菌研究用試薬

–Bacstain– Bacterial Viability Detection Kit – DAPI/PI

細菌研究用試薬

DAPI/PI で菌を二重染色

蛍光二重染色に最適化した試薬を添加するだけのプロトコル
複数の指標で薬剤効果や菌の状態を評価できる
培養法と比較して評価にかかる時間を大幅に短縮できる

製品コード

BS08　 –Bacstain– Bacterial Viability Detection Kit – DAPI/PI

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 set	￥20,000	341-09721

＜使用回数の目安＞ 1 set あたり、約 100 検体分

キット内容

1 set	DAPI Solution PI Solution	25 μl × 4 25 μl × 4

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ご購入方法
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マニュアル

取扱説明書日本語
取扱説明書 English

技術情報

蛍光染色例

–Bacstain– Bacterial Viability Detection Kit – DAPI/PI、CTC/DAPI、CFDA/DAPI を用いて、S. aureus（グラム陽性菌）ならびに E. coli（グラム陰性菌）をイメージングしました。

S. aureus（グラム陽性菌）の染色例

E. coli（グラム陰性菌）の染色例

よくある質問

Q Bacterial Viability Detection Kitで使用している染色試薬の蛍光特性を教えてください。

蛍光特性とその性質は以下の表をご参照ください。

なお、小社では共焦点蛍光顕微鏡と落射蛍光顕微鏡で観察した実績があります。

色素名	極大励起波長/極大蛍光波長	励起フィルター（推奨）	備考
DAPI	360 nm / 460 nm	UV 励起	膜損傷の有無に関わらず細胞内に透過し、核酸を染色する。
PI	530 nm / 620 nm	G 励起	膜損傷を有する細胞内にのみ透過し、核酸を染色する。
CTC	430, 480 nm / 630 nm	Bもしくは G 励起	呼吸活性により還元され赤色蛍光色素 (CTC formazan) を生成する。
CFDA	493 nm / 515 nm	B 励起	エステラーゼにより加水分解され緑色蛍光色素 (carboxy-fluorescin) を生成する。

Q グラム陽性菌やグラム陰性菌で染色に違いはありますか？

各色素の特徴として、以下が挙げられます。

DAPI：	グラム陰性菌では染まりにくい場合があります。
CTC：	グラム陽性、陰性に関わらず、CTCのみでは染まりにくい傾向がありますが、-Bacstain– Bacterial Viability Detection Kit – CTC/DAPI（BS09）に付属するEnhancing Reagentを使用することで染色能が向上します。
CFDA：	一般的にグラム陰性菌では染まりにくい傾向がございますが、本製品のプロトコルに記載しています、0.1mol/lリン酸バッファーを使用することで染色能が向上します。

Q 染色前に細菌を洗浄する必要はありますか？: A

細菌は染色前に洗浄する必要があります。

細菌を洗浄しない場合、DAPIやPIでは菌体外に存在する核酸を染色したり、CTCやCFDAでは培地成分の影響で蛍光を示すことでバックグラウンド上昇の原因となる可能性があります。

Q 細胞懸濁液や染色後の洗浄には何を使用すれば良いですか？: A

滅菌したPBSや生理食塩水が使用できます。

Q 蛍光が弱い場合の対処方法を教えてください。: A

試薬の添加量を増やすか（試薬濃度を上げる）、インキュベート時間を長くすることをご検討ください。

Q 二重染色後に菌を固定化することはできますか？: A

可能です。小社では二重染色後に終濃度4％のホルムアルデヒドで菌を固定化した実績があります。

取扱条件

取扱条件
1.保存方法：冷凍,遮光

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日本同仁化学CTC/DAPI で菌を二重染色 -Bacstain- Bacterial Viability Detection Kit – CTC/DAPI　

发表于2024年11月10日由上海金畔生物科技有限公司

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–Bacstain– Bacterial Viability Detection Kit – CTC/DAPI

06 細菌研究用試薬

–Bacstain– Bacterial Viability Detection Kit – CTC/DAPI

細菌研究用試薬

CTC/DAPI で菌を二重染色

蛍光二重染色に最適化した試薬を添加するだけのプロトコル
複数の指標で薬剤効果や菌の状態を評価できる
培養法と比較して評価にかかる時間を大幅に短縮できる

製品コード

BS09　 –Bacstain– Bacterial Viability Detection Kit – CTC/DAPI

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 set	￥36,000	348-09731

キット内容

1 set	CTC DAPI Solution Enhancing Reagent	10 mg × 4 25 μl × 4 700 μl × 1

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マニュアル

取扱説明書日本語
取扱説明書 English

技術情報

蛍光染色例

S. aureus（グラム陽性菌）の染色例

E. coli（グラム陰性菌）の染色例

よくある質問

Q Bacterial Viability Detection Kitで使用している染色試薬の蛍光特性を教えてください。

蛍光特性とその性質は以下の表をご参照ください。

なお、小社では共焦点蛍光顕微鏡と落射蛍光顕微鏡で観察した実績があります。

色素名	極大励起波長/極大蛍光波長	励起フィルター（推奨）	備考
CTC	430, 480 nm / 630 nm	Bもしくは G 励起	呼吸活性により還元され赤色蛍光色素 (CTC formazan) を生成する。
DAPI	360 nm / 460 nm	UV 励起	膜損傷の有無に関わらず細胞内に透過し、核酸を染色する。
CFDA	493 nm / 515 nm	B 励起	エステラーゼにより加水分解され緑色蛍光色素 (carboxy-fluorescin)を生成する。
PI	530 nm / 620 nm	G 励起	膜損傷を有する細胞内にのみ透過し、核酸を染色する。

Q グラム陽性菌やグラム陰性菌で染色に違いはありますか？

各色素の特徴として、以下が挙げられます。

DAPI：	グラム陰性菌では染まりにくい場合があります。
CTC：	グラム陽性、陰性に関わらず、CTCのみでは染まりにくい傾向がありますが、-Bacstain– Bacterial Viability Detection Kit – CTC/DAPI（BS09）に付属するEnhancing Reagentを使用することで染色能が向上します。
CFDA：	一般的にグラム陰性菌では染まりにくい傾向がございますが、本製品のプロトコルに記載しています、0.1mol/lリン酸バッファーを使用することで染色能が向上します。

Q 染色前に細菌を洗浄する必要はありますか？: A

細菌は染色前に洗浄する必要があります。
細菌を洗浄しない場合、DAPIやPIでは菌体外に存在する核酸を染色したり、CTCやCFDAでは培地成分の影響で蛍光を示すことでバックグラウンド上昇の原因となる可能性があります。

Q 菌の懸濁液や染色後の洗浄には何を使用すれば良いですか？: A

滅菌したPBSや生理食塩水が使用できます。

Q 蛍光が弱い場合の対処方法を教えてください。: A

試薬の添加量を増やすか（試薬濃度を上げる）、インキュベート時間を長くすることをご検討ください。

Q 二重染色後に菌を固定化することはできますか？: A

可能です。小社では二重染色後に終濃度4％のホルムアルデヒドで菌を固定化した実績があります。

取扱条件

取扱条件
1.医薬用外劇物, 2.保存方法：冷蔵,遮光
法規制毒物および劇物取締法：	劇物

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日本同仁化学比色試薬／金属指示薬 Chlorophosphonazo-III　

发表于2024年11月10日由上海金畔生物科技有限公司

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

Chlorophosphonazo-III

15 比色試薬／金属指示薬

Chlorophosphonazo-III

比色試薬／金属指示薬

比色試薬／金属指示薬

製品コード

C010　 Chlorophosphonazo-III
CAS番号

1914-99-4
化学名

2,7-Bis(4-chloro-2-phosphonophenylazo)-1,8-dihydroxy-3,6-naphthalenedisulfonic acid
分子式・分子量

C₂₂H₁₆Cl₂N₄O₁₄P₂S₂=757.37

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
100 mg	￥4,600	345-00581
1 g	￥26,200	341-00583

試験成績書

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ご購入方法
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技術情報

応用可能な金属

沈殿滴定用指示薬として：SO₄^2－
比色試薬として：Ba, Be, Bi, Ca, Mg, Np, Pa, Pd, Pu, Sc, Sr, Th，Ti, U, Y, Zr, 希土類など

参考文献

参考文献を表示する

1) K. Ueno, T. Imamura and K. L. Cheng, "Handbook of Organic Analitical Reagents 2nd Edition", CRC Press, 1992.
2) L. R. Snyder and B. E. Buell, "Characterization and Routine Determination of Nonbasic Nitrogen Types in Cracked Gas Oils by Linear Elution Adsorption Chromatography", Anal. Chem., 1964, 36(4), 767.
3) J. W. Ferguson, J. J. Richard, J. W. O'laughlin and C. V. Banks, "Simultaneous Spectrophotometric Determination of Calcium and Magnesium with Chlorophosphonazo-III", Anal. Chem., 1964, 36, 796.
4) D. S. Howell, J. C. Pita, J. F. Marquez, "Ultramicro Spectrophotometric Determination of Calcium in Biologic Fluids", Anal. Chem., 1966, 38, 434.
5) T. Yamamoto, "Extraction-photometric Determination of Uranium(IV) with Chlorophosphonazo-III", Anal. Chim. Acta, 1973, 65, 329.
6) M. Zenki, T. Masutani and T. Yokoyama, "Repetitive Determination of Calcium Ion and Regeneration of a Chromogenic Reagent Using Chlorophosphonazo III and an Ion Exchanger in a Circulatory Flow Injection System", Anal. Sci., 2002, 18, 1137.

取扱条件

規格
性状：	本品は、赤褐色～黒紫色結晶性粉末で水に溶ける。
水溶状：	試験適合
吸光度：	0.530 以上(550～570 nm付近）
強熱残分(硫酸塩)：	20.0% 以下
IRスペクトル：	試験適合

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日本同仁化学CFDA/PI で菌を二重染色 -Bacstain- Bacterial Viability Detection Kit – CFDA/PI　

发表于2024年11月10日由上海金畔生物科技有限公司

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

–Bacstain– Bacterial Viability Detection Kit – CFDA/PI

06 細菌研究用試薬

–Bacstain– Bacterial Viability Detection Kit – CFDA/PI

細菌研究用試薬

CFDA/PI で菌を二重染色

蛍光二重染色に最適化した試薬を添加するだけのプロトコル
複数の指標で薬剤効果や菌の状態を評価できる
培養法と比較して評価にかかる時間を大幅に短縮できる

製品コード

BS10　 –Bacstain– Bacterial Viability Detection Kit – CFDA/PI

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 set	￥36,000	345-09741

キット内容

1 set	CFDA Solution PI Solution	375 μl × 4 25 μl × 4

試験成績書

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ご購入方法
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マニュアル

取扱説明書日本語
取扱説明書 English

技術情報

蛍光染色例

S. aureus（グラム陽性菌）の染色例

E. coli（グラム陰性菌）の染色例

よくある質問

Q Bacterial Viability Detection Kitで使用している染色試薬の蛍光特性を教えてください。

蛍光特性とその性質は以下の表をご参照ください。

なお、小社では共焦点蛍光顕微鏡と落射蛍光顕微鏡で観察した実績があります。

色素名	極大励起波長/極大蛍光波長	励起フィルター（推奨）	備考
CFDA	493 nm / 515 nm	B 励起	エステラーゼにより加水分解され緑色蛍光色素 (carboxy-fluorescin)を生成する。
PI	530 nm / 620 nm	G 励起	膜損傷を有する細胞内にのみ透過し、核酸を染色する。
CTC	430, 480 nm / 630 nm	Bもしくは G 励起	呼吸活性により還元され赤色蛍光色素 (CTC formazan) を生成する。
DAPI	360 nm / 460 nm	UV 励起	膜損傷の有無に関わらず細胞内に透過し、核酸を染色する。

Q グラム陽性菌やグラム陰性菌で染色に違いはありますか？

各色素の特徴として、以下が挙げられます。

DAPI：	グラム陰性菌では染まりにくい場合があります。
CTC：	グラム陽性、陰性に関わらず、CTCのみでは染まりにくい傾向がありますが、-Bacstain– Bacterial Viability Detection Kit – CTC/DAPI（BS09）に付属するEnhancing Reagentを使用することで染色能が向上します。
CFDA：	一般的にグラム陰性菌では染まりにくい傾向がございますが、本製品のプロトコルに記載しています、0.1 mol/lリン酸バッファーを使用することで染色能が向上します。

Q 染色前に細菌を洗浄する必要はありますか？: A

細菌は染色前に洗浄する必要があります。
細菌を洗浄しない場合、DAPIやPIでは菌体外に存在する核酸を染色したり、CTCやCFDAでは培地成分の影響で蛍光を示すことでバックグラウンド上昇の原因となる可能性があります。

Q 菌の懸濁液や染色後の洗浄には何を使用すれば良いですか？: A

滅菌したPBSや生理食塩水が使用できます。

Q 蛍光が弱い場合の対処方法を教えてください。: A

試薬の添加量を増やすか（試薬濃度を上げる）、インキュベート時間を長くすることをご検討ください。

Q CFDA/PIの二重染色後にホルムアルデヒドで固定化するのはなぜでしょうか？: A

菌の中からCFDAが漏洩することを防ぐために固定化します。

Q 取扱説明書に記載されている[0.1 mol/l-PB (pH8.5, 5%(w/v)-NaCl, 0.5 mmol/l-EDTA ]の調製方法を教えてください。: A

以下の調製例をご参考ください。

調製例）100 ml調製する場合

1. 100 ml以上の容器に、以下の試薬を計量し混合
　　・0.98g リン酸（液体）
　　・5g NaCl
　　・18.6 mg EDTA・2NA
2．超純水約70 ml程度で撹拌溶解後、1 mol/l NaOH溶液でpHを8.5に調整
3．100 mlメスフラスコに2の溶液を移し、超純水で100 mlにメスアップ

取扱条件

取扱条件
1.危険物第4類　第3石油類　危険等級Ⅲ, 2.火気厳禁 3.保存方法：冷凍,遮光
危険・有害シンボルマーク

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日本同仁化学比色試薬／金属指示薬 Cu-PAN　

发表于2024年11月10日由上海金畔生物科技有限公司

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Cu-PAN

15 比色試薬／金属指示薬

Cu-PAN

比色試薬／金属指示薬

比色試薬／金属指示薬

製品コード

C016　 Cu-PAN
化学名

Composite preparation of Cu-EDTA and PAN(Ratio 11.1:1)

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 g	￥3,200	348-00831
10 g	￥11,000	344-00833

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技術情報

応用可能な金属

キレート滴定金属指示薬として：
　＜酸性＞　Al, Cd, Co, Fe^3＋, Ga, Hg, In, Ni, V, Zn, 希土類
　＜アルカリ性＞　Ca, Cu, Mg, Mn^2＋

参考文献

参考文献を表示する

1) H. Flaschka and H. Abdine, "EDTA Titrations Using Copper-PAN Complex as Indicator", Chem. Anal., 1956, 45, 58

よくある質問

Q Alを滴定で測りたいのですが、どのような方法がありますか？: A

（XO指示薬を使用した逆滴定も別にご紹介してますので、よろしければそちらもご覧下さい）
ここでは、Cu-PAN指示薬を用いた直接滴定を紹介します。

＜試薬＞
・0.1～0.01 mol/l EDTA標準液
・Cu-PAN指示薬溶液
・緩衝液　10％酢酸アンモニウム水溶液，氷酢酸

＜操作＞
・試料溶液中のAlの濃度は100 ml中 2～20 mg程度にする。
　試料溶液約100 mlをとり、強酸性の場合はアンモニア水にて約pH 1になるまで中和し、酢酸アンモニウム
　および氷酢酸を滴下してpH 3～4に調製する。
　Cu-PAN指示薬約0.5 mlを滴下すると溶液は赤紫色を呈するので、ほとんど沸騰するまで過熱しながら
　EDTA標準液でゆっくり滴定する。終点近くなるとEDTA標準液を1滴滴下するごとに黄変するが、加熱・攪拌
　を続けていると間もなく橙黄色となる。
　EDTA標準液1滴を加え、1分間加熱しても橙黄色に変えられない点を終点とする。
　Al³⁺の量が10 mg以下の場合は、0.01 mol/l EDTA標準液、10 mg以上の場合は0.1 mol/l EDTA標準液をもちいるのが便利である。

　0.01 mol/l EDTA 1 ml = 0.2698 mg Al
　 0.1 mol/l EDTA 1 ml = 2.698 mg Al

＜備考＞
・Fe³⁺が共存するとその合量が測定される。
・酸性試料溶液にいきなりアンモニア水を加えてpH 3～4に調製すると、理論値より低い測定値が得られる。
　これは中和する際、局部的にアルカリが過剰になり、Alの多核錯体が生成するからである。
　したがって、pH調製の際はまず酸性溶液に10％の酢酸アンモニウム溶液を滴下してpH 4(プロムフェノールブルー）
　となし、引き続いて氷酢酸5 mlを加え、最後にpH試験紙をもちいてpH 3～4に調製する。

・多量のアルカリ土類金属および30 mg以下のMnが共存しても差し支えない。Fe³⁺,Ni²⁺,Bi³⁺その他の
　二価金属が共存すると合量が測定される。またこんせきの重金属イオンが存在しても測定値には影響しない。
　多量のSO₄^2-が共存する場合には変色が妨害される。

・Al³⁺とEDTAとのキレート生成反応速度は温度およびpHによって影響をうけ、温度の高いほど、またpHの低いほど
　反応速度が大きくなる。他方、Al-EDTAの条件安定度定数およびCu-PAN指示薬の変色機構から考えてpHが
　あまり低すぎることは望ましくなく、pH 3～4が最適である。

・Cu-PANをもちいるこの滴定法は直接滴定できる点、および他の直接滴定法に比べ変色が鋭敏な点で、
　実用的なAl滴定法ということができる。

＊「キレート滴定」上野景平著（南江堂出版）より

Q Coの滴定方法を教えてください。: A

ここでは、Cu-PANを指示薬とする直接滴定に関し記載します。

滴定の際の液性は酸性になりますので、中性～弱アルカリ性で行われたい方は「MX」の項目をご覧下さい。

【試薬】0.01 mol/l EDTA標準液
　　　　Cu-PAN指示薬溶液
　　　　緩衝液 50%酢酸および酢酸ナトリウム飽和水溶液
　　　　アスコルビン酸(結晶)

【操作】①試料溶液のCo²⁺の濃度は100 ml中10 mg以下にする。
　　　　②試料溶液に酢酸または酢酸ナトリウム溶液を加えてpH 3～4に調製し、
　　　　　Cu-PAN指示薬溶液数滴を加えると赤紫色を呈する。
　　　　③アスコルビン酸少量を加え沸騰するまで加熱しながら滴定する。
　　　　　終点の変色は　赤紫→黄色　約30秒加熱しても赤みのあらわれない点を終点とする。

　　　　　　0.01 mol/l EDTA 1mL = 0.5893 mg Co

【備考】
　　・滴定の途中でCo(II)-EDTAが空気酸化されてCo(III)-EDTAになると溶液が赤紫色となり
　　　指示薬の変色が認めにくくなる。そのためアスコルビン酸を加えてCo-(III)-EDTAの生成を防ぐ。
　　　また、Co(II)-EDTAも赤色を呈するので、試料中のCo²⁺濃度は上記操作に述べた限度を超えないようにする。
　　・溶液を加熱する代わりに、等容量のメタノールを添加してもよい。
　　・Co-PANも赤紫色を呈するので、Cu-EDTAの代わりにPANを指示薬としてCo²⁺を直接滴定することもできるが、
　　　変色の鋭敏度はCu-PAN指示薬の場合よりも劣る。また同じ原理で、Cu標準液で逆滴定してもよい。
　　・Th⁴⁺,Bi³⁺,Fe³⁺,Al³⁺,Cu²⁺,Ni²⁺,Hg²⁺,Pb²⁺などは一緒に滴定され、Zn²⁺,Cd²⁺などは一部滴定にかかってくる。
　　　アルカリ土類金属イオンおよびMn²⁺は滴定にかからず、また指示薬の色も妨害しない。
　　・XO指示薬をもちいれば、ヘキサミンを緩衝液としてpH 5～6で滴定することもできる。
　　　終点の変色は赤紫→黄。これらの指示薬をもちいるとき常温で滴定することもできるが、
　　　加熱したほうが変色は鋭敏である。
　　　またCu²⁺が共存する時はチオ尿素,チオ硫酸ナトリウムでマスクしたり、あるいはアスコルビン酸でCu+に
　　　還元したのちNH₄SCNまたはKIを加えて沈殿マスクすることもできる。
　　　ただし、こんせきのNi²⁺,Fe³⁺,Al³⁺が共存してもこれらの指示薬はブロッキングをおこす。

＊「キレート滴定」上野景平著（南江堂出版）より

Q Niを滴定で測りたいのですが、どのようにすればよいでしょうか？: A

（MXを使用した直接滴定も紹介しております。『MX』の項を参照ください）
ここでは、Cu-PAN指示薬による直接滴定を紹介いたします。

＜試薬＞
・0.01 mol/l EDTA標準液
・Cu-PAN指示薬溶液
・緩衝液　50％酢酸,酢酸ナトリウム飽和水溶液

＜操作＞
・試料溶液中のNi²⁺の濃度は100 ml中 15 mg以下にする。
①試料溶液はあらかじめ中和し、酢酸ナトリウム溶液4～5滴を加えたのち50％酢酸を滴下してpH 3～4に調製する。
　（あるいはpH 3～4にした酢酸-酢酸ナトリウム混合液を添加する）
②つぎにCu-PAN指示薬溶液約0.5 mlを添加したのち、溶液を沸騰するまで加熱し、EDTA標準液でゆっくり滴定する。
③終点の変色は　赤紫→黄
　EDTA標準液1滴を加え加熱して30秒間黄色を保つ点を終点とする。

　0.01mol/l EDTA 1 ml = 0.5871 mg Ni

＜備考＞
・Cu-PANのかわりにPANをもちいても50～70℃で滴定することができるが、終点における鋭敏度は
　Cu-PANより劣るので、終点近くでは特にゆっくり滴定しなければならない。
・Cu-PANを指示薬とすればNi²⁺はpH 3～10の範囲で直接滴定することができるが、pHが低いほど
　妨害イオンの影響は少なくなる。pH 3で滴定する場合には大量のアルカリ土類金属、少量のZn²⁺,Cd²⁺,Mn²⁺などが
　共存しても影響しない。安定度定数の高いBi³⁺,Th⁴⁺,Al³⁺,Fe³⁺,Hg²⁺,Co²⁺,Cu²⁺などは定量的あるいは
　半定量的に滴定にかかってくるので、適当な方法でマスクまたは除去しなければならない。
・XO指示薬はNi²⁺によってブロッキングをおこすので直接滴定には使用できない。

Q Cu-PAN指示薬をもちいたVの滴定方法を教えてください。: A

下記方法を参考にして下さい。
＜試薬＞
・0.01 mol/l EDTA標準液
・Cu-PAN指示薬溶液
・緩衝剤　50％酢酸および酢酸ナトリウム飽和水溶液
・アスコルビン酸(結晶)

＜操作＞
①5～20 mg以下のVを含む試料溶液50 mlに酢酸または酢酸ナトリウム溶液を加えてpH 4～4.3に調製する。
②これにアスコルビン酸0.5 gを加えると溶液は青色になるので、加熱沸騰させる。
　アスコルビン酸の添加量が十分な場合は、いったん青色になった溶液は加熱と共に色があせて
　次第に淡青緑色になる。もし加熱してこの変色が認められない場合はさらにアスコルビン酸を
　追加してバナジウムを十分還元する。
③最後にCu-PAN指示薬0.1 mlを加え加熱しつつEDTA標準液で滴定する。
　終点の変色は　赤橙→黄緑
　
　0.01 mol/l EDTA 1 ml = 0.5094 mg V

＜備考＞
・アルカリ土類金属をのぞく2～4価金属イオンは一緒に滴定される。PO₃^4-,AsO₄^3-,WO₄^3-などは
　妨害しない。Moはこの滴定条件で還元されると濃青色となるため指示薬の呈色を妨害する。
　Feその他の重金属は酸化物として除去し、ろ液についてVを滴定するのが実際的である。
　また、イオン交換分離法も応用されている。

・この方法はタングステン合金中のVの定量に応用されている。
　この際、Wは大量の酒石酸でマスクできる。

・同様な滴定条件でXO指示薬をもちい、Th標準液で逆滴定することもできる。
・同じくXO指示薬をもちい、pH 5～5.5でPbまたはZn標準液で逆滴定することもできる。

＊「キレート滴定」上野景平著（南江堂出版）より

Q Cu-PAN指示薬の調製方法を教えてください。: A

Cu-PAN 1 g を50%ジオキサン水溶液 100 mlに溶解して指示薬溶液としてください。
＊20～50%のジオキサン、イソプロピルアルコール、50～70%のメチルアルコール、エチルアルコールなどの水溶液で同様に調製いただいても結構です。

取扱条件

規格
性状：	本品は、灰赤褐色～黄褐色粉末で、ジオキサン水溶液 (50%) に溶ける。
ジオキサン水溶状溶状：	試験適合
吸光度：	0.500 以上(470 nm付近)
鋭敏度：	試験適合

取扱条件
1.安衛法

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日本同仁化学菌蛍光染色用色素 -Bacstain- CFDA solution　

发表于2024年11月10日由上海金畔生物科技有限公司

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–Bacstain– CFDA solution

06 細菌研究用試薬

–Bacstain– CFDA solution

細菌研究用試薬

菌蛍光染色用色素

製品コード

BS03　 –Bacstain– CFDA solution
CAS番号

79955-27-4(CFDA:5-isomer)
化学名

5(6)-Carboxyfluorescein diacetate, solution, DMSO solution

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
100 Assays	￥18,600	342-91321

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マニュアル

取扱説明書日本語
取扱説明書 English
プロトコル細菌を蛍光染色したい

技術情報

菌蛍光染色用色素 -Bacstain- CFDA solution　

B.cereusの二重染色（CFDA/DAPI） S.epidermidisの二重染色（CFDA/PI）

菌蛍光染色用色素 -Bacstain- CFDA solution　

参考文献

参考文献を表示する

1) N. Yamaguchi and M. Nasu, " Flow cytometric analysis of bacterial respiratory enzymatic activity in the natural aquatic environment ".Journal of Appl. Microbiol., 1997, 83, 43.
2) M. Kawai, N. Yamaguchi and M. Nasu, “Rapid enumeration of physiologically active bacteria in purified water used in the pharmaceutical manufacturing process ", Journal of Appl. Microbiol.,1999, 86, 496.
3) T. Someya et al.,” Fluorescence Direct Count of Bacteria in Various Manures and Composts as Compared with Plate Count(Program for 2005 Annual Meeting of Japanese Society of Soil Science and Plant Nutrition)”, Journal of the science of soil and manure, Japan, 2005, 76(4), 401.

よくある質問

Q 取扱説明書に記載されている[0.1 mol/l-PB (pH8.5, 5%(w/v)-NaCl, 0.5 mmol/l-EDTA ]の調製方法を教えてください。: A

以下の調製例をご参考ください。

調製例）100 ml調製する場合

1. 100 ml以上の容器に、以下の試薬を計量し混合
　　・0.98 g リン酸（液体）
　　・5 g NaCl
　　・18.6mg EDTA・2NA
2．超純水約70 ml程度で撹拌溶解後、1 mol/l NaOH溶液でpHを8.5に調整
3．100 mlメスフラスコに2の溶液を移し、超純水で100 mlにメスアップ

取扱条件

規格
性状：	無色～微黄色液体
含量：	試験適合

取扱条件
1.危険物第4類　第3石油類　危険等級Ⅲ, 2.火気厳禁 3.保存方法：冷蔵,遮光
危険・有害シンボルマーク

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日本同仁化学比色試薬／金属指示薬 Cyanoline Blue　

发表于2024年11月10日由上海金畔生物科技有限公司

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Cyanoline Blue

15 比色試薬／金属指示薬

Cyanoline Blue

比色試薬／金属指示薬

比色試薬／金属指示薬

製品コード

C017　 Cyanoline Blue
化学名

Composite preparation of monopyrazolone and bispyrazolone

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
25 g	￥15,000	343-00842

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技術情報

溶解例

340 mg/25 mⅬ (ピリジン)

参考文献

参考文献を表示する

1) 今村寿明, "ピラゾール誘導体の分析試薬としての応用", ドータイトニュース, 1966, 14(3), 2.
2) J. M. Kruse and M. G. Mellon, "Colorimetric Determination of Cyanide and Thiocyanate", Anal. Chem., 1953, 25, 446.
3) L. Prochazkova, "Spectrophotometric Determination of Ammonia as Rubazoic Acid with Bispyrazolone Reagent", Anal. Chem., 1964, 36, 865.
4) S. Baar, "The Micro Determination of Cyanide: Its Application to the Analysis of Whole Blood", Analyst, 1966, 91, 268

よくある質問

Q CyanolineBlue を用いた、全シアン測定方法等を教えてください。: A

シアノリンブルー溶液:0.27 gをピリジン20 mLに加温して溶かし、水100 mLを混合する（冷蔵保存で1週間安定）。

測定方法の詳細はJISに記載されておりますので、ここでは簡単に説明いたします。

【方法】
　工業用水並びに排水中のCN-は、加熱蒸留して、NaOH溶液（ｐH 11.0)に
吸収させておく。（この蒸留操作についてはJISに図解説明されています）
　蒸留水溶液20mLを共栓付き三角フラスコ100mLにとり、緩衝液10 mLと
クロラミンT溶液0.25mLを加える。直ちに密栓して静かに振り混ぜ、3～5分放置したのち
シアノリンブルー溶液15mLを加え、水浴中（25℃）に約30分間ひたし、
うすい紅色から紫色を経て安定な青色になるまで発色させる。
10 mmセルに移し、620 nmで比色する。

・クロラミンT溶液
　クロラミンT 1.25 gを水に溶かして100 mLとする。
・リン酸緩衝液（ｐH 6.8)
・CN-標準液
　KCN 2.51 gを水に溶かして1 Lとする（これを原液とする）
　その濃度は、p-ジメチルアミノベンジリデンローダニン-アセトン溶液（0.02 %)0.5 mLを
　指示薬として、0.1N AgNO3標準液で滴定して標定する。
　必要に応じ、1μg/1 mLの濃度に希釈して使用する。

＊JIS規格に添った試験をされる際は、それぞれの試験方法をご覧になり、
　その方法に準じて行ってください。

取扱条件

規格
性状：	本品は、白色～淡黄色粉末でピリジンに溶ける。
ピリジン溶状：	試験適合
鋭敏度：	試験適合

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日本同仁化学菌蛍光染色用色素 -Bacstain- DAPI solution　

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–Bacstain– DAPI solution

06 細菌研究用試薬

–Bacstain– DAPI solution

細菌研究用試薬

菌蛍光染色用色素

製品コード

BS04　 –Bacstain– DAPI solution
CAS番号

28718-90-3(DAPI)
化学名

4′,6-Diamidino-2-phenylindole, dihydrochloride, solution
分子式・分子量

C₁₆H₁₇Cl₂N₅=350.25

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
100 assays	￥9,000	349-91331

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マニュアル

取扱説明書日本語
取扱説明書 English
プロトコル細菌を蛍光染色したい

技術情報

特徴

-Bacstain- series は細菌用の蛍光染色試薬群である。
異なる3つの手法から菌の生存率を求める事ができる。

　1) 膜損傷
　2) 細胞内酵素活性
　3) 呼吸活性

菌蛍光染色用色素 -Bacstain- DAPI solution　

取扱条件

規格
性状：	本品は、無色～黄色液体である。
含量：	試験適合

取扱条件
1.保存方法：冷蔵,遮光

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日本同仁化学比色試薬／金属指示薬 Diantipyrylmethane　

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Diantipyrylmethane

15 比色試薬／金属指示薬

Diantipyrylmethane

比色試薬／金属指示薬

比色試薬／金属指示薬

製品コード

D008　 Diantipyrylmethane
CAS番号

1251-85-0
化学名

Di(4-antipyryl)methane, monohydrate
分子式・分子量

C₂₃H₂₄N₄O₂･H₂O=406.48

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
25 g	￥9,000	342-00932

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技術情報

応用可能な金属イオン

抽出、比色試薬として：Fe, Mo, Ti, Uなど
重量分析試薬として：Bi, Ca, Cd, Co, Cu, Hg, Ir, Os, Pb, Sr, Ti, Znなど
抽出分離試薬として：Ag, Cd, Cr, Cu, Fe, Sc, Sn, Te, Ti, V, Zn, Zr, 希土類金属など

参考文献

参考文献を表示する

参考文献

1) 梶山緑郎, 山口勝正, "ジアンチピリルメタンによるフェロニオブ中チタン定量法", Jpn. Anal., 1967, 16, 908.
2) 石井一, "ジアンチピリルメタンを用いるセメントおよび原料中のチタンの吸光光度定量法", Jpn. Anal., 1967, 16, 110.
3) 石井一, "分析試薬としてのジアンチピリルメタン" ドータイトニュースレター, 1969, 17, 2.
4) 石井一, "ジアンチピリルメタンとその誘導体", Jpn. Anal., 1972, 21, 665.
5) C. H. Chung, "Simultaneous Determination of Iron and Titanium in Silicate Rocks by Using Diantipyrinylmethane with Dual-wavelength Spectrophotometry", Anal. Chim. Acta, 1983, 154, 259.
6) N. Uehara, K. Morimoto and Y. Shijo, "Determination of Titanium(III) in River Water by Ion-pair Reversed-phase High-performance Liquid Chromatography with 4,4'-Diantipyrylmethane", Analyst, 1991, 116, 27.

取扱条件

規格
性状：	本品は、白色結晶性粉末で希塩酸に溶ける。
純度(HPLC)：	99.0％以上
希塩酸溶状：	試験適合
融点：	148～159℃
吸光度(チタン錯体)：	0.280 以上(390 nm付近)
水分：	2.0～5.0％
IRスペクトル：	試験適合

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日本同仁化学菌蛍光染色用色素 -Bacstain- AO solution　

发表于2024年11月10日由上海金畔生物科技有限公司

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–Bacstain– AO solution

06 細菌研究用試薬

–Bacstain– AO solution

細菌研究用試薬

菌蛍光染色用色素

製品コード

BS05　 –Bacstain– AO solution
CAS番号

65-61-2(AO)
化学名

3,6-Bis(dimethylamino)acridine hydrochloride, solution
分子式・分子量

C₁₇H₂₀ClN₃=301.81

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
100 Assays	￥9,200	346-91341

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マニュアル

取扱説明書日本語
取扱説明書 English
プロトコル細胞を蛍光染色したい

技術情報

菌蛍光染色用色素 -Bacstain- AO solution　

参考文献

参考文献を表示する

1) J. E. Hobbie et al., ” Use of Nucleopore Filters for Counting Bacteria by Fluorescence Microscopy”, Appl. Environ. Microbiol., 1977, 1225.
2) S. F. Nishino, “Direct Acridine Orange Counting of Bacteria Preserved with Acidified Lugol Iodine”, Appl. Environ. Microbiol., 1986, 602.

取扱条件

規格
性状：	本品は、黄色～橙色液体の凍結品である。
含量：	試験適合

取扱条件
1.保存方法：冷凍,遮光

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日本同仁化学比色試薬／金属指示薬 DAN　

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DAN

15 比色試薬／金属指示薬

DAN

比色試薬／金属指示薬

比色試薬／金属指示薬

製品コード

D027　 DAN
CAS番号

771-97-1
化学名

2,3-Diaminonaphthalene
分子式・分子量

C₁₀H₁₀N₂=158.2

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 g	￥29,600	343-06481

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技術情報

溶解例

50 mg/100 mL（0.1 mol/L-塩酸）

参考文献

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1) J. H. Wiersma, "2,3-Diaminonaphthalene as a Spectrophotometric and Fluorometric Reagent for the Determination of Nitrite Ion", Anal. Lett., 1970, 3, 123.
2) 平木敬三, 由井収, 平山宏, 西川泰治, 重松垣信, "海水中のセレンのけい光定量", Jpn. Anal., 1973, 22, 712.
3) G. L. Wheeler and P. F. Lott, "Rapid Determination of Trace Amounts of Selenium(IV), Nitrate, and Nitrate by High-pressure Liquid Chromatography Using 2,3-Diaminonaphthalene", Microchem. J., 1974, 19, 390.
4) 石川登志樹, 橋本芳一, "蛍光高速液体クロマトグラフィーによる降水中の極微量セレン(IV)及びセレン(VI)の定量", 分析化学, 1988, 37, 344.
5) Y. Mukai, H. Hara and K. Taniguchi, "2,3-Diaminonaphthalene を用いる亜硝酸及び亜硝酸アミルの蛍光定量", 分析化学, 1991, 40, 105.
6) 向日良夫, 原久子, 谷口寛一, "2,3-ジアミノナフタレンを用いる亜硝酸及び亜硝酸アミルの蛍光定量", 分析化学, 1991, 40, 105.
7) E. M. Rodriguez, M. T. Sanz and C. D. Romero, "Critical Study of Fluorimetric Determination of Selenium in Urine", Talanta, 1994, 41, 2025.
8) A. M. Miles, Y. Chen, W. Owens and M. B. Grisham, "Fluorometric Determination of Nitric Oxide", Methods: A Companion to Methods in Enzymology, 1995, 7, 40.

取扱条件

規格
性状：	本品は、白色～淡黄褐色粉末で熱水、熱アルコール及び希塩酸等に溶ける。
希塩酸溶状：	試験適合
融点：	185～200℃
IRスペクトル：	試験適合

取扱条件
1.保存方法：冷凍,遮光

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日本同仁化学菌蛍光染色用色素 -Bacstain- PI solution　

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–Bacstain– PI solution

06 細菌研究用試薬

–Bacstain– PI solution

細菌研究用試薬

菌蛍光染色用色素

製品コード

BS07　 –Bacstain– PI solution
化学名

3,8-Diamino-5-[3-(diethylmethylammonio)propyl]-6-phenylphenanthridinium diiodide, solution
分子式・分子量

C₂₇H₃₄I₂N₄=668.39

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
100 assays	￥9,000	340-91361

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マニュアル

取扱説明書日本語
取扱説明書 English
プロトコル細菌を蛍光染色したい

技術情報

–Bacstain– series は細菌用の蛍光染色試薬群である。
異なる3つの手法から菌の生存率を求める事ができる。

　1) 膜損傷
　2) 細胞内酵素活性
　3) 呼吸活性

菌蛍光染色用色素 -Bacstain- PI solution　

取扱条件

規格
性状：	本品は、橙色～赤色液体の凍結品である。
含量：	試験適合

取扱条件
1.保存方法：冷凍,遮光

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日本同仁化学比色試薬／金属指示薬 HNB　

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HNB

15 比色試薬／金属指示薬

HNB

比色試薬／金属指示薬

比色試薬／金属指示薬

製品コード

H007　 HNB
CAS番号

63451-35-4
化学名

2-Hydroxy-1-(2-hydroxy-4-sulfo-1-naphthylazo)-3,6-naphthalenedisulfonic acid, trisodium salt
分子式・分子量

C₂₀H₁₁N₂Na₃O₁₁S₃=620.48

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 g	￥5,400	349-01461

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技術情報

応用可能な金属

キレート滴定指示薬として：Ca
比色試薬として：アルカリ土類, UO₂^2＋, 希土類

参考文献

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1) A. Itoh and K. Ueno, "Evaluation of 2-Hydroxy-1-(2-Hydroxy-4-Sulpho-1-Naphthylazo)-3-Naphthoic Acid and Hydroxynaphthol Blue as Metallochromic Indicators in the EDTA Titration of Calcium", Analyst, 1970, 95, 583.
2) 伊藤敦子, 上野景平, "ヒドロキシナフトールブルー(HNB)指示薬を用いるカルシウム、マグネシウムの連続キレート滴定", Jpn. Anal., 1970, 19, 394.
3) M. Sugawara, Y. Rokugawa and T. Kambara, "Catalytic Decomposition of the Excess Reagent in the Spectrophotometric Determination of Copper(II) with O,O'-Dihydroxyazo Compounds", Bull. Chem. Soc. Jpn., 1977, 50, 3206.
4) T. Yamane, "Flow Injection Determination of Hydrogen Peroxide by Means of the Manganese-catalyzed Oxidation of Hydroxynaphthol Blue", 分析化学, 1984, 33, 203.
5) 山根兵, 上條幹人, "フローインジェクション－吸光光度法による水の硬度測定", 分析化学, 1984, 33, 110.
6) 内田和秀, 友田正子, 斉藤眞一, "ヒドロキシナフトールブルーを用いたフローインジェクション分析によるカルシウムの定量", 分析化学, 1985, 34, 568.
7) M. M. Ferris and M. A. Leonard, "Examination of Metallochromic Indicators and Water-soluble Reagents for Metals by Planar Electrophoresis", Analyst, 1986, 111, 351.

取扱条件

規格
性状：	本品は、黒紫色粉末で水及びアルコールによく溶ける。
水溶状：	試験適合
吸光度：	0.600 以上(647 nm付近)
吸光度(カルシウム錯体)：	0.310 以上(562 nm付近)
強熱残分(硫酸塩)：	35.0％以下
鋭敏度：	試験適合
IRスペクトル：	試験適合

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日本同仁化学膜タンパク質可溶化剤 BIGCHAP　

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BIGCHAP

07 膜タンパク質可溶化剤

BIGCHAP

膜タンパク質可溶化剤
デタージェント

膜タンパク質可溶化剤

製品コード

B043　 BIGCHAP
CAS番号

86303-22-2
化学名

N,N-Bis(3-D-gluconamidopropyl)cholamide
分子式・分子量

C₄₂H₇₅N₃O₁₆=878.06

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 g	￥12,400	348-06171
5 g	￥44,600	344-06173

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マニュアル

パンフレットプロテオミクス関連試薬

技術情報

溶解例

500 mg/10 mL水）

参考文献

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1) L. M. Hjelmeland, W. A. Klee and J. C. Osborne Jr, "A New Class of Nonionic Detergents with a Gluconamide Polar Group", Anal. Biochem., 1983, 130, 485.
2) V. Lakshmi and C. Monder, "Extraction of 11β-Hydroxysteroid Dehydrogenase from Rat Liver Microsomes by Detergents", J. Steroid Biochem., 1985, 22, 331.
3) T. Harayama, H. Shindou, R. Ogasawara, A. Suwabe and T. Shimizu, "Identification of a Novel Noninflammatory Biosynthetic Pathway of Platelet-activating Factor", J. Biol. Chem., 2008, 283, 11097.

よくある質問

Q cmc（臨界ミセル濃度）はタンパク質可溶化にどのように関係するのですか。: A

界面活性剤はcmc以上の濃度でないとミセルを形成しません。

その濃度以上でないとタンパク質の可溶化も出来ません。
タンパク質を可溶化する場合、最終濃度がcmc以上となるように調製する必要があります。

一方、タンパク質を可溶化した溶液からこの界面活性剤を除去するときにもcmcは重要となります。
透析を例として説明します。ミセルは界面活性剤の集合体ですが、ミセルを形成することで
一つの大きな分子として振る舞います。

ミセルを形成している場合、ミセルは透析膜を通過出来ません。
よって、cmcが比較的大きい分子ほど、モノマーの状態の比率が高くなる傾向がありますので、
透析により簡単に除去できます。

cmc以下に希釈すれば透析はさらに容易になるため、cmcが高いほど低い希釈率で透析ができます。

下記に弊社で販売している膜タンパク質可溶化剤のcmc値を示しておりますので、ご参照ください。
http://www.dojindo.co.jp/download/det/det1.pdf

取扱条件

規格
性状：	本品は、白色粉末で吸湿性があり、水、アルコール等に溶ける。
純度(HPLC)：	95.0％以上
水溶状：	試験適合
吸光度(1％)：	0.100 以下(260 nm)
IRスペクトル：	試験適合

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日本同仁化学比色試薬／金属指示薬 N,N-ジエチルジチオカルバミド酸銀　

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N,N-ジエチルジチオカルバミド酸銀

15 比色試薬／金属指示薬

N,N-ジエチルジチオカルバミド酸銀

比色試薬／金属指示薬

比色試薬／金属指示薬

製品コード

JS01　 N,N-ジエチルジチオカルバミド酸銀
CAS番号

1470-61-7
化学名

Silver N,N-diethyldithiocarbamate
分子式・分子量

(C₂H₅)₂NCS₂Ag=256.14

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 g	￥3,000	340-09073
5 g	￥6,200	344-09071

試験成績書

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ご購入方法
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技術情報

溶解例

1 g/50 mL（熱ピリジン）250 mg/50 mL（熱クロロホルム）

参考文献

参考文献を表示する

1) 中尾正三、ドータイトニュースレター, 1962, 10(4), 2.
2) 山本大二郎, 上田隆, "ジエチルジチオカルバミン酸銀塩法を用いるヒ素分析における塩基の影響", 分析化学, 1972, 21, 938.
3) A. G. Howard and H. Arbab-Zavar, "Sequential Spectrophotometric Determination of Inorganic Arsenic(III) and Arcenic(V) Species", Analyst, 1980, 105, 33.
4) 川井英雄, "生体試料中の微量元素の定量", ぶんせき, 1990.
5) JIS K 0101,工業用水試験方法, 財団法人日本規格協会, 1998.
6) JIS K 0102,工場排水試験方法, 財団法人日本規格協会, 2010.
7) 第8版食品添加物公定書, 日本食品添加物協会.
8) 河川水質試験方法（案）1997年版試験方法編, 建設省河川局監修, 技報堂出版株式会社.
9) 底質調査法, 環境省水環境部, 平成13年3月.
10) 鉱泉分析法指針（改訂）, 環境省自然環境局, 平成14年3月.
11) 食品衛生検査指針理化学編, 厚生労働省監修, 社団法人食品衛生協会, 2005.
12) 日本薬局方, 第16改正.
13) 上水試験方法 2011年版 III.金属類編, 社団法人日本水道協会.

よくある質問

Q N,N-ジエチルジオカルバミド酸銀[JS01]と Arsemate[AO12]との違いを教えてください。: A

N,N-ジエチルジチオカルバミド酸銀 [製品コード: JS01] と Arsemate[製品コード: A012]は、同じ構造の化合物です。
「JIS K9512に適合した試薬」はN,N-ジエチルジチオカルバミド酸銀[製品コード：JS01]となります。

取扱条件

規格
性状：	N, N-ジエチルジチオカルバミド酸銀は、淡黄色の結晶又は結晶性粉末で、ピリジンにやや溶けにくく、クロロホルムに溶けにくく、水、エタノール及びジエチルエーテルにほとんど溶けない。融点(分解)は、約175℃である。
純度(滴定)：	98.0％以上
ピリジン溶状：	試験適合
ひ素分析適合性：	試験適合
IRスペクトル：	試験適合

取扱条件
1.保存方法：遮光

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日本同仁化学膜タンパク質可溶化剤 CHAPS　

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CHAPS

07 膜タンパク質可溶化剤

CHAPS

膜タンパク質可溶化剤
デタージェント

膜タンパク質可溶化剤

製品コード

C008　 CHAPS
CAS番号

75621-03-3
化学名

3-[(3-Cholamidopropyl)dimethylammonio]propanesulfonate
分子式・分子量

C₃₂H₅₈N₂O₇S=614.88

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 g	￥2,800	341-04721
5 g	￥10,800	347-04723
25 g	￥37,400	349-04722
100 g	￥122,200	345-04724

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マニュアル

プロトコル膜タンパク質等を可溶化したい
パンフレットプロテオミクス関連試薬

技術情報

溶解例

1 g/5 mL（水）

参考文献

参考文献を表示する

1)L. M. Hjelmeland, "A Nondenaturing Zwitterionic Detergent for Membrane Biochemistry: Design and Synthesis", Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1980, 77, 6368.
2)W. F. Simonds, G. Koski, R. A. Streaty, L. M. Hjelmeland and W. A. Klee, "Solubilization of Active Opiate Receptors", Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1980, 77, 4623.
3)A. J. Bitonti, J. Moss, L. Hjelmeland and M. Vaughan, "Resolution and Activity of Adenylate Cyclase Components in Azwitterionic Cholate Derivative[3-[(3-Cholamidopropyl)Dimethylammonio]-1-Propanesulfonate]", Biochemistry, 1982, 21, 3650.
4)B. Rivnay, S. A. Wank, G. Poy and H. Metzger, "Phospholipids Stabilize the Interaction Between the α and β Subunits of the Solubilized Receptor for Immunoglobulin E", Biochemistry, 1982, 21, 6922.
5)G. H. Perdew, H. W. Schaup and D. P. Selivonchick, "The Use of Zwitterionic Detergent in Two-dimensional Gel Electrophoresis of Trout Liver Microsomes", Anal. Biochem., 1983, 135, 453.
6)T. Matoh, J. Watanabe and E. Takahashi, "Sodium, Potassium, Chloride, and Betaine Concentrations in Isolated Vacuoles from Salt-grown Atriplex gmelini Leaves", Plant Physiol., 1987, 84, 173.
7)R. Horiuchi, K. Yamauchi, H. Hayashi, S. Koya, Y. Takeuchi and K. Kato, "Purification and Characterization of 55-kDa Proteinwith 3,5,3'-Triiodo-L-thyronine-binding Activity and Protein Disulfide-isomerase Activity from Beef Liver Membrane", Eur. J. Biochem., 1989, 183, 529.
8)本田秀明, 斉藤卓也, 山口淳二, "両性界面活性剤による細胞骨格露出法", 細胞, 1990, 22, 43.
9)N. Funasaki, S. Hada and S. Neya, "Odd-even Alternation in the Aggregation Nember Dependence of Stepwise Aggregation Constants", J. Phys. Chem., 1991, 95, 1847.
10)D. S. Liscia, T. Alhadi and B. K. Vonderhaar, "Solubilization of active prolactin receptors by a nondenaturing zwitterionic detergent", J. Biol. Chem., 1982, 257, 9401.
11)M. Yoshida, N. Itano, Y. Yamada and K. Kim, "CARBOHYDRATES, LIPIDS, AND OTHER NATURAL PRODUCTS:In Vitro Synthesis of Hyaluronan by a Single Protein Derived from Mouse HAS1 Gene and Characterization of Amino Acid Residues Essential for the Activity", J. Biol. Chem., 2000, 275, 497.
12)K. Sato, Y. Noda and K. Yoda, "Kei1: A Novel Subunit of Inositolphosphorylceramide Synthase, Essential for Its Enzyme Activity and Golgi Localization", Mol. Biol. Cell, 2009, 20, 4444.
13)A. Yamashita, M. Watanabe, K. Sato, T. Miyashita, T. Nagatsuka, H. Kondo, N. Kawagishi, H. Nakanishi, R. Kamata, T. Sugiura and K. Waku, "Reverse Reaction of Lysophosphatidylinositol Acyltransferase", J. Biol. Chem., 2003, 278(32), 30382.
14)K. Yamamoto, E. Uchida, N. Urushino, T. Sakaki, N. Kagawa, N. Sawada, M. Kamakura, S. Kato, K. Inouye and S. Yamada, "Identification of the Amino Acid Residue of CYP27B1 Responsible for Binding of 25-Hydroxyvitamin D3 Whose Mutation Causes Vitamin D-dependent Rickets Type 1", J. Biol. Chem., 2005, 280(34), 30511.
15)J. Wang, Y. Okamoto, J. Morishita, K. Tsuboi, A. Miyatake and N. Ueda, "Functional Analysis of the Purified Anandamide-generating Phospholipase D as a Member of the Metallo--lactamase Family", J. Biol. Chem., 2006, 281, 12325.
16)N. Ueda, K. Yamanaka and S. Yamamoto, "Purification and Characterization of an Acid Amidase Selective for N-Palmitoylethanolamine, a Putative Endogenous Anti-inflammatory Substance", J. Biol. Chem., 2001, 276, 35552.
17)H. Fukui, H. Mizuguchi, Y. Q. Liu, N. P. Wang, H. Hayashi, K. Kangawa, T. Wakamiya, R. Leurs, T. Shiba and H. Matsuo, "Purification and Characterization of [3H] Mepyramine (Histamine H1 Antagonist)-Binding Protein from Rat Liver: A Highly Homologous Protein with Cytochrome P450 2D", J. Biochem., 1995, 117, 993.

よくある質問

Q cmc（臨界ミセル濃度）はタンパク質可溶化にどのように関係するのですか。: A

界面活性剤はcmc以上の濃度でないとミセルを形成しません。

　その濃度以上でないとタンパク質の可溶化も出来ません。
タンパク質を可溶化する場合、最終濃度がcmc以上となるように調製する必要があります。

　一方、タンパク質を可溶化した溶液からこの界面活性剤を除去するときにもcmcは重要となります。
透析を例として説明します。ミセルは界面活性剤の集合体ですが、ミセルを形成することで
一つの大きな分子として振る舞います。
　ミセルを形成している場合、ミセルは透析膜を通過出来ません。
よって、cmcが比較的大きい分子ほど、モノマーの状態の比率が高くなる傾向がありますので、
透析により簡単に除去できます。
　cmc以下に希釈すれば透析はさらに容易になるため、cmcが高いほど低い希釈率で透析ができます。

下記に同仁販売製品一覧およびcmc値を示します。ご参照ください。
http://www.dojindo.co.jp/download/det/det1.pdf

取扱条件

規格
性状：	本品は、白色粉末で吸湿性があり、水、アルコールに溶ける。
純度(HPLC)：	97.0% 以上
水溶状(20％)：	試験適合
水溶状(3％)：	試験適合 0.220 以下(280 nm)
水分：	3.0% 以下
IRスペクトル：	試験適合

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日本同仁化学Caキレート滴定用指示薬・その他金属比色試薬 Murexide　

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Murexide

15 比色試薬／金属指示薬

Murexide

比色試薬／金属指示薬

Caキレート滴定用指示薬・その他金属比色試薬

製品コード

M011　 Murexide
CAS番号

3051-09-0
化学名

Purpuric acid, ammonium salt
分子式・分子量

C₈H₈N₆O₆=284.19

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
5 g	￥6,200	346-01834
25 g	￥27,200	340-01832

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ご購入方法
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技術情報

溶解例

10 mg/100 mL（熱水）

参考文献

参考文献を表示する

1) H. Gordon and G. Norwitz, "Spectrophotometric Determination of Calcium in Zirconium Powder by Use of Murexide", Talanta, 1972, 19, 7.
2) K. S. Balaji, S. D. Kumar and P. Gupta-Bhaya, "Stability Constants of Calcium and Lanthanide Ions with Murexide", Anal. Chem., 1978, 50, 1972.

よくある質問

Q Murexideを滴定指示薬として使用する際の調整方法を教えてください。: A

硫酸カリウムを用いて、Murexide:K₂SO₄=1:100～300　に粉砕混和してください。

＊弊社にはMurexideとK₂SO₄を粉砕混合した製品「MX（同仁品コード：M012)」もございます。
そちらもご利用ください。

取扱条件

規格
性状：	本品は、赤紫色～暗赤紫色粉末である。
水溶状：	試験適合
吸光度：	0.200以上 (525 nm付近)
鋭敏度：	試験適合
強熱残分(硫酸塩)：	0.20％以下
IRスペクトル：	試験適合

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日本同仁化学膜タンパク質可溶化剤 CHAPSO　

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CHAPSO

07 膜タンパク質可溶化剤

CHAPSO

膜タンパク質可溶化剤
デタージェント

膜タンパク質可溶化剤

製品コード

C020　 CHAPSO
CAS番号

82473-24-3
化学名

3-[(3-Cholamidopropyl)dimethylammonio]-2-hydroxypropanesulfonate
分子式・分子量

C₃₂H₅₈N₂O₈S=630.88

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 g	￥8,800	347-05161
5 g	￥31,000	343-05163

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ご購入方法
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マニュアル

パンフレットプレテオミクス関連試薬

技術情報

溶解例

1 g/20 mⅬ（水）

参考文献

参考文献を表示する

1) D. S. Liscia, T. Alhadi and B. K. Vonderhaar, "Solubilization of Active Prolactin Receptors by a Nondenaturing Zwitterionic Detergent", J. Biol. Chem., 1982, 257, 9401.
2) 浅田浩二, "アスコルビン酸ペルオキシダーゼ -クロロプラストでの過酸化水素消去系", 蛋白質、核酸、酵素, 1988, 33, 2957.
3)C. Miyake, W.-H. Cao and K. Asada, "Purification and Molecular Properties of the Thylakoid-Bound Ascorbate Peroxidase in Spinach Chloroplasts", Plant Cell Physiol, 1993, 34(6), 881.
4)N. Inoue, J. Kuranari, S. Harada, H. Nakajima, M. Ohbayashi, Y. Nakamura, N. Miyasaka, K. Ezawa, F. Ban and K. Yanagi, "Use of enzyme-linked immunosorbent assays with chimeric fusion proteins to titrate antibodies against Epstein-Barr virus nuclear antigen 1.", J. Clin. Microbiol., 1992, 30(6), 1442

よくある質問

Q cmc（臨界ミセル濃度）はタンパク質可溶化にどのように関係するのですか。: A

界面活性剤はcmc以上の濃度でないとミセルを形成しません。

　その濃度以上でないとタンパク質の可溶化も出来ません。
タンパク質を可溶化する場合、最終濃度がcmc以上となるように調製する必要があります。

　一方、タンパク質を可溶化した溶液からこの界面活性剤を除去するときにもcmcは重要となります。
透析を例として説明します。ミセルは界面活性剤の集合体ですが、ミセルを形成することで
一つの大きな分子として振る舞います。
　ミセルを形成している場合、ミセルは透析膜を通過出来ません。
よって、cmcが比較的大きい分子ほど、モノマーの状態の比率が高くなる傾向がありますので、
透析により簡単に除去できます。
　cmc以下に希釈すれば透析はさらに容易になるため、cmcが高いほど低い希釈率で透析ができます。

下記に同仁販売製品一覧およびcmc値を示します。ご参照ください。
http://www.dojindo.co.jp/download/det/det1.pdf

取扱条件

規格
性状：	本品は、白色粉末で水及びアルコールに溶ける。
純度(HPLC)：	96.0% 以上
水溶状：	試験適合
水分：	3.0% 以下
IRスペクトル：	試験適合

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日本同仁化学比色試薬／金属指示薬 MX　

发表于2024年11月10日由上海金畔生物科技有限公司

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

MX

15 比色試薬／金属指示薬

MX

比色試薬／金属指示薬

比色試薬／金属指示薬

製品コード

M012　 MX
化学名

Composite preparation of ammonium purpurate and potassium sulfate

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
25 g	￥2,800	347-01842
100 g	￥9,400	349-01841

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技術情報

溶解例

1 g/1,000 mL（水）

よくある質問

Q Coの滴定方法を教えてください。: A

ここでは、MXを指示薬とする直接滴定に関し記載します。

滴定の際の液性は中性～弱アルカリ性になりますので、酸性で行われたい方は「Cu-PAN」の項目をご覧下さい。

【試薬】0.01 mol/L EDTA標準液
　　　　MX指示薬希釈粉末
　　　　約1 mol/L アンモニア水

【操作】①試料溶液のCo²⁺の濃度は100 mL中25 mg以下にする。
　　　　②溶液が酸性の場合にはアンモニア水で中和しておく。
　　　　③MX指示薬希釈粉末約0.2 gを加えると溶液は橙黄色を呈するので、さらにアンモニアを徐々に滴下して
　　　　　黄色になったところで止める(pH≒8になっている）
　　　　④この溶液をEDTA標準液で滴定する。
　　　　　終点の変色は　黄→紫

　　　　　　0.01 mol/L EDTA 1 mL = 0.5893 mg Co

【備考】
　　・滴定時の溶液の緩衝能力が小さいため、滴定の途中でpHが下がり、溶液が橙黄色になることがある。
　　　この場合には、さらにアンモニア水を追加、液を再び黄色にして滴定を続ける。
　　・過剰のアンモニアが存在すると、Co-色素錯体よりCo(NH₃)₆²⁺の方が安定なため、Co-色素錯体が分解する。
　　　上記の操作による時にはNH₃の濃度を最小限にとどめているので、EDTAに結合していないCo²⁺は
　　　ほとんど遊離の水和イオンとして溶液中に存在するものと考えられる。
　　・重金属イオンは妨害する。このうちPb²⁺,Cu²⁺,Zn²⁺,Co²⁺などはチオグリコール酸で、Al³⁺はNH₄Fでマスクできる。
　　　少量のMg²⁺,Ba²⁺,Sr²⁺は共存しても差し支えないが、Ca²⁺は一部滴定にかかってくる。
　　　一般にCoを適当な方法で分離・抽出したのちにこの方法を滴定するほうがよい。

＊「キレート滴定」上野景平著（南江堂出版）より

Q MX指示薬を使ってNiを滴定で測りたいと思います。方法を教えてください。: A

下記方法を参考にして下さい。
＜試薬＞
・0.01 M EDTA標準液
・MX指示薬希釈粉末
・緩衝液（約１M NH₄Cl溶液、および濃アンモニア水）

＜操作＞
・試料溶液中のNi濃度は100 mL中15 mL以下にする。
酸性溶液はまず中和し、指示薬粉末約0.2 gと、要すればマスク剤を加える。
ほぼ中性の溶液にNH₄Cl溶液10 mLを加え、液がなおpH7以下であれば溶液は橙黄色を
呈するから、アンモニア水をゆっくり滴下して黄色にする（pH7くらい）
次にEDTA標準溶液で滴定するが、滴定の途中でH(+)が遊離するためにpHが低くなって
再び橙黄色になった場合は、アンモニア水を追加してpHを調整する。
終点に近くなってから濃アンモニア水10 mLを加えて強アンモニアアルカリ性とし、
滴定を続けると、終点において黄→青紫の明瞭な変色が認められる。

　0.01 M EDTA 1 mL = 0.5869 mg Ni

＜備考＞
・MX指示薬による終点の変色は、pH7～12の領域で十分明瞭であるが、
　pH10～12において最も鋭敏に変色する。しかしながら滴定初期において
　溶液のpHをこのようなアルカリ性領域にまであげると水酸化物の沈殿を
　生じるので、大部分のNiがEDTAと結合した後、上述の操作に従って強アルカリ性にする。
　ただ、アンモニアの濃度はCu,Coの滴定におけるほど厳密に調整する必要は無い。
・MX指示薬はNiに対して金属指示薬と同時にpH指示薬としての役にもたっている。
　すなわちNi-MXキレートはpH7を中心に橙⇔黄と変色するため、滴定に先立って
　溶液のpHを7前後に調整するのに利用されている。
・滴定のpHは10～12であるから、二価以上の金属のほとんど全てが一緒に滴定される。
　このうちAl(3+),Ca(2+)および希土類金属イオンはNH₄Fで、また少量のAl(3+),Mn(3+),Fe(3+)
　はトリエタノールアミンでマスクできる。また、Ni(2+)の5倍量までのFe(3+)は
　10％ピロリン酸ナトリウム溶液50 mLを添加することによりマスクされる。
　Cu(2+)はまた、アスコルビン酸にてCu(+)に還元し、窒素気流中で滴定すればその妨害を
　避けることも出来る。
　Hg(2+)はKIによってHgI₄(2-)としてマスクされる。
・この滴定法は種々の金属イオンと共存するNi(2+)を有機試薬で沈殿分離したのち、
　その沈殿中のNiを定量するとき便利である。たとえば、合金中のNiを定量するのに
　試料を溶解した後、ジメチルグリオキシムでNiを沈殿させ、沈殿を濃塩酸で分解・蒸発乾固
　したのちこの滴定法を応用する。
　あるいは、沈殿を塩酸に溶かし、過剰のEDTA標準液を加え、アンモニアアルカリ性(pH9～10)に
　して、Zn標準液で逆滴定する。

＊「キレート滴定法」上野景平著（南江堂出版）より

取扱条件

規格
性状：	本品は、桃色～赤紫色粉末で水に溶ける。
水溶状：	試験適合 0.150～0.200(525 nm)
鋭敏度：	試験適合

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日本同仁化学膜タンパク質可溶化剤 Sodium cholate (purified)　

发表于2024年11月10日由上海金畔生物科技有限公司

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Sodium cholate (purified)

07 膜タンパク質可溶化剤

Sodium cholate (purified)

膜タンパク質可溶化剤
デタージェント

膜タンパク質可溶化剤

製品コード

C321　 Sodium cholate (purified)
CAS番号

361-09-1
化学名

Cholic acid, sodium salt, monohydrate
分子式・分子量

C₂₄H₃₉NaO₅･H₂O=448.57

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
5 g	￥6,800	346-06471
25 g	￥26,200	344-06472

試験成績書

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ご購入方法
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マニュアル

プロトコル膜タンパク質等を可溶化したい
パンフレットプロテオミクス関連試薬

参考文献

参考文献を表示する

1)H. Furukawa, T. Hamada, M. K. Hayashi, T. Haga, Y. Muto, H. Hirota, S. Yokoyama, K. Nagasawa and M. Ishiguro, "Conformation of Ligands Bound to the Muscarinic Acetylcholine Receptor", Mol. Pharmacol., 2002, 62, 778.
2)I. M. Fearnley, J. Carroll, R. J. Shannon, M. J. Runswick, J. E. Walker and J. Hirst, "GRIM-19, a Cell Death Regulatory Gene Product, Is a Subunit of Bovine Mitochondrial NADH:Ubiquinone Oxidoreductase (Complex I)", J. Biol. Chem., 2001, 276, 38345.

よくある質問

Q cmc（臨界ミセル濃度）はタンパク質可溶化にどのように関係するのですか。: A

界面活性剤はcmc以上の濃度でないとミセルを形成しません。

その濃度以上でないとタンパク質の可溶化も出来ません。
タンパク質を可溶化する場合、最終濃度がcmc以上となるように調製する必要があります。

一方、タンパク質を可溶化した溶液からこの界面活性剤を除去するときにもcmcは重要となります。
透析を例として説明します。ミセルは界面活性剤の集合体ですが、ミセルを形成することで
一つの大きな分子として振る舞います。
ミセルを形成している場合、ミセルは透析膜を通過出来ません。
よって、cmcが比較的大きい分子ほど、モノマーの状態の比率が高くなる傾向がありますので、
透析により簡単に除去できます。
　cmc以下に希釈すれば透析はさらに容易になるため、cmcが高いほど低い希釈率で透析ができます。

下記に同仁販売製品一覧およびcmc値を示します。ご参照ください。

http://www.dojindo.co.jp/download/det/det1.pdf

取扱条件

規格
性状：	本品は、白色粉末で、水に溶ける。
純度(HPLC)：	98.0% 以上
水溶状：	試験適合 0.052 以下 (280 nm)
水分：	3.5～5.0%
IRスペクトル：	試験適合

取扱条件
1.吸湿注意

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日本同仁化学比色試薬／金属指示薬 Nitroso-PSAP　

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Nitroso-PSAP

15 比色試薬／金属指示薬

Nitroso-PSAP

比色試薬／金属指示薬

比色試薬／金属指示薬

製品コード

N010　 Nitroso-PSAP
CAS番号

80459-15-0
化学名

2-Nitroso-5-[N-n-propyl-N-(3-sulfopropyl)amino]phenol
分子式・分子量

C₁₂H₁₈N₂O₅S=302.35

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
100 mg	￥3,600	341-04081
1 g	￥16,800	347-04083

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ご購入方法
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技術情報

表鉄(II)試薬の比色定量条件の比較

pHの影響

Nitroso-PSAP金属錯体の吸収スペクトル、試薬ブランク対照

参考文献

参考文献を表示する

1) K. Toei, S. Motomizu and T. Korenaga, "Nitrosophenol and Nitrosonaphthol Derivatives as Reagents for the Spectrophotometric Determination of Iron and Determination of Micro-amounts in Waters with 2-Nitroso-5-dimethylaminophenol", Analyst, 1975, 100, 629.
2) 斉藤幹彦, 堀口大吉, 喜納兼勇, "新規水溶性ニトロソフェノール誘導体による微量鉄(II)の吸光光度定量", 分析化学, 1981, 30, 635.
3) 酒井忠雄, 大野典子, "2-ニトロソ-5-(N-エチル-N-スルホプロピルアミノ)フェノールを用いたフローインジェクション法による微量鉄の定量", 分析化学, 1984, 33, 332.
4) 吉田烈, 上野景平, "2-ニトロソ-5-(N-プロピル-N-スルホプロピルアミノ)フェノールを用いるコバルトの吸光光度定量", 分析化学, 1985, 34, 77.
5) 高柳美行, 森島泰雄, 後藤鉦二, 長谷川岩三, 福田常男, 八代有, "フェロキシダーゼ活性を利用したヒト血清セルロプラスミンの測定", 日本臨床化学会年会記録第25集, 1985, 25, 88.
6) 徳井健志, 奥田潤, "ヒト血清蛋白結合性Fe²⁺, Fe³⁺(第3報）-Nitroso-PSAPを用いるFe²⁺, Fe³⁺の分析法-", 日本臨床化学会年会記録第26集, 1986, 158.
7) N. Ohno and T. Sakai, "Spectrophotometric Determination of Iron in Boiler and Well Waters by Flow Injection Analysis Using 2-Nitroso-5-(N-propyl-N-sulphopropylamino)phenol", Analyst, 1987, 112, 1127.
8) I. Yoshida, F. Sagara and K. Ueno, "Studies of the Stabilities of Scandium, Yttrium, and Lanthanoid-ion Complexes of 2-Nitroso-5-(N-propyl-3-sulfopropylamino)phenol", Bull. Chem. Soc. Jpn., 1988, 61, 2639.
9) I. Yoshida, F. Sagara and K. Ueno, "Potentiometric Studies on the Binding Properties of Protons, Some Divalent and Tervalent Metal Ions with 2-Nitroso-5-(N-propyl-3-sulfopropylamino)phenol", Anal. Sci., 1988, 4, 69.
10) T. Makino, K. Nakamura and K. takahara, "A high-performance liquid immunoaffinity chromatography method for determining transferrin-bound iron in serum", Clinica Chimica Acta, 2011, 412, 914.

取扱条件

規格
性状：	本品は、黄色～黄褐色粉末で水に溶ける。
純度(吸光度)：	97.0％以上
水溶状：	試験適合
吸光度(ブランク)：	0.050 以下(756 nm付近)
モル吸光係数(鉄錯体)：	44,000 以上(756 nm付近)
IRスペクトル：	試験適合

取扱条件
1.保存方法：冷蔵

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日本同仁化学膜タンパク質可溶化剤 deoxy-BIGCHAP　

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deoxy-BIGCHAP

07 膜タンパク質可溶化剤

deoxy-BIGCHAP

膜タンパク質可溶化剤
デタージェント

膜タンパク質可溶化剤

製品コード

D045　 deoxy-BIGCHAP
CAS番号

86303-23-3
化学名

N,N-Bis(3-D-gluconamidopropyl)deoxycholamide
分子式・分子量

C₄₂H₇₅N₃O₁₅=862.06

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
500 mg	￥15,400	346-05614

試験成績書

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マニュアル

パンフレットプロテオミクス関連試薬

技術情報

溶解例

1 g/20 mL（水）

参考文献

参考文献を表示する

1) L. M. Hjelmeland, W. A. Klee and J. C. Osborne Jr., "A New Class of Nonionic Detergents with a Gluconamide Polar Group", Anal. Biochem., 1983, 130, 485.
2) A. Aigner, M. Jager, R. Pasternack, P. Weber, D. Wienke and S. Wolf, "Purification and Characterization of Cysteine-S-conjugate N-Acetyltransferase from Pig Kidney", Biochem. J., 1996, 317, 213.
3)Y. Akutsu, T. Nakajima-Kambe, N. Nomura and T. Nakahara, "Purification and Properties of a Polyester Polyurethane-Degrading Enzyme from Comamonas acidovorans TB-35", Appl. Environ. Microbiol., 1998, 64, 62.

よくある質問

Q cmc（臨界ミセル濃度）はタンパク質可溶化にどのように関係するのですか。: A

界面活性剤はcmc以上の濃度でないとミセルを形成しません。

その濃度以上でないとタンパク質の可溶化も出来ません。
タンパク質を可溶化する場合、最終濃度がcmc以上となるように調製する必要があります。

一方、タンパク質を可溶化した溶液からこの界面活性剤を除去するときにもcmcは重要となります。
透析を例として説明します。ミセルは界面活性剤の集合体ですが、ミセルを形成することで一つの大きな分子として振る舞います。

ミセルを形成している場合、ミセルは透析膜を通過出来ません。
よって、cmcが比較的大きい分子ほど、モノマーの状態の比率が高くなる傾向がありますので、透析により簡単に除去できます。
cmc以下に希釈すれば透析はさらに容易になるため、cmcが高いほど低い希釈率で透析ができます。

下記に同仁販売製品一覧およびcmc値を示します。ご参照ください。
http://www.dojindo.co.jp/download/det/det1.pdf

取扱条件

規格
性状：	本品は、白色粉末で水に溶ける。
純度(HPLC)：	95.0％以上
水溶状：	試験適合
吸光度：	0.100 以下(260 nm)
IRスペクトル：	試験適合

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日本同仁化学比色試薬／金属指示薬 NN diluted with potassium sulfate　

发表于2024年11月10日由上海金畔生物科技有限公司

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NN diluted with potassium sulfate

15 比色試薬／金属指示薬

NN diluted with potassium sulfate

比色試薬／金属指示薬

比色試薬／金属指示薬

製品コード

N012　 NN diluted with potassium sulfate
化学名

Composite preparation of 2-hydroxy-1-(2-hydroxy-4-sulfo-1-naphthylazo)-3-naphthoic acid and potassium sulfate

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
25 g	￥2,800	343-02042
500 g	￥19,200	347-02045

試験成績書

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技術情報

溶解例

1 g/1,000 mL（水）

取扱条件

規格
性状：	本品は、紫色粉末である。
吸光度：	0.150 以上(550 nm)
鋭敏度：	試験適合

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日本同仁化学膜タンパク質可溶化剤 n-Dodecyl-β-D-maltoside　

发表于2024年11月10日由上海金畔生物科技有限公司

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n-Dodecyl-β-D-maltoside

07 膜タンパク質可溶化剤

n-Dodecyl-β-D-maltoside

膜タンパク質可溶化剤
デタージェント

膜タンパク質可溶化剤

製品コード

D316　 n-Dodecyl-β-D-maltoside
CAS番号

69227-93-6
化学名

N-Dodecyl-β-D-maltopyranoside
分子式・分子量

C₂₄H₄₆O₁₁=510.62

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 g	￥14,000	341-06161
5 g	￥55,800	347-06163
25 g	￥Request

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パンフレットプロテオミクス関連試薬

技術情報

溶解例

100 mg/10 mL（水）

参考文献

参考文献を表示する

1) T. VanAken, S. Foxall-Vanaken, S. Castleman and S. Ferguson-Miller, "Alkyl Glycoside Detergents: Synthesis and Applications to the Study of Membrane Proteins", Methods in Enzymol., 1986, 125, 27.
2)H. Shigematsu, T. Sokabe, R. Danev, M. Tominaga and K. Nagayama, "A 3.5-nm Structure of Rat TRPV4 Cation Channel Revealed by Zernike Phase-contrast Cryoelectron Microscopy", J. Biol. Chem., 2010, 285, 11210.
3)Y. Kofuku, C. Yoshiura, T. Ueda, H. Terasawa, T. Hirai, S. Tominaga, M. Hirose, Y. Maeda, H. Takahashi, Y. Terashima, K. Matsushima and I. Shimada, "Structural Basis of the Interaction between Chemokine Stromal Cell-derived Factor-1/CXCL12 and Its G-protein-coupled Receptor CXCR4", J. Biol. Chem., 2009, 284, 35240.
4)A. J. Kuszak, S. Pitchiaya, J. P. Anand, H. I. Mosberg, N. G. Walter and R. K. Sunahara, "Purification and Functional Reconstitution of Monomeric μ-Opioid Receptors: ALLOSTERIC MODULATION OF AGONIST BINDING BY Gi2", J. Biol. Chem., 2009, 284, 26732.
5)S. Okuda and H. Tokuda, "Model of mouth-to-mouth transfer of bacterial lipoproteins through inner membrane LolC, periplasmic LolA, and outer membrane LolB", PNAS, 2009, 106(14), 5877.
6)B. C. Jennings, M. J. Nadolski, Y. Ling, M. B. Baker, M. L. Harrison, R. J. Deschenes and M. E. Linder, "2-Bromopalmitate and 2-(2-hydroxy-5-nitro-benzylidene)-benzo[b]thiophen-3-one inhibit DHHC-mediated palmitoylation in vitro", J. Lipid Res., 2009, 50, 233.
7)N. Taniguchi and H. Tokuda, "Molecular Events Involved in a Single Cycle of Ligand Transfer from an ATP Binding Cassette Transporter, LolCDE, to a Molecular Chaperone, LolA", J. Biol. Chem., 2008, 283(13), 8538.

よくある質問

Q cmc（臨界ミセル濃度）はタンパク質可溶化にどのように関係するのですか。: A

界面活性剤はcmc以上の濃度でないとミセルを形成しません。

その濃度以上でないとタンパク質の可溶化も出来ません。
タンパク質を可溶化する場合、最終濃度がcmc以上となるように調製する必要があります。

一方、タンパク質を可溶化した溶液からこの界面活性剤を除去するときにもcmcは重要となります。
透析を例として説明します。ミセルは界面活性剤の集合体ですが、ミセルを形成することで
一つの大きな分子として振る舞います。
ミセルを形成している場合、ミセルは透析膜を通過出来ません。
よって、cmcが比較的大きい分子ほど、モノマーの状態の比率が高くなる傾向がありますので、
透析により簡単に除去できます。
cmc以下に希釈すれば透析はさらに容易になるため、cmcが高いほど低い希釈率で透析ができます。

下記に同仁販売製品一覧およびcmc値を示します。ご参照ください。
https://www.dojindo.co.jp/download/det/det1.pdf

取扱条件

規格
性状：	本品は、白色粉末で水及びアルコールに溶ける。
純度(GC)：	98.0％以上
水溶状(0.1％)：	試験適合
水溶状(1％)：	試験適合 0.100 以下(260 nm)
比旋光度(20℃)：	46.0～50.0 ^ocm²deg^-1
水分：	1.0％以下
IRスペクトル：	試験適合

取扱条件
1.保存方法：冷蔵

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日本同仁化学比色試薬／金属指示薬 NN　

发表于2024年11月10日由上海金畔生物科技有限公司

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

NN

15 比色試薬／金属指示薬

NN

比色試薬／金属指示薬

比色試薬／金属指示薬

製品コード

N013　 NN
CAS番号

3737-95-9
化学名

2-Hydroxy-1-(2-hydroxy-4-sulfo-1-naphthylazo)-3-naphthoic acid
分子式・分子量

C₂₁H₁₄N₂O₇S=438.41

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 g	￥5,200	342-02051

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技術情報

溶解例

50 mg/10 ml（1 mol/l KOH）→100 ml(水)、 10 mg/100 ml（メチルアルコール）

参考文献

参考文献を表示する

1) K. Ueno, T. Imamura and K. L. Cheng, "Handbook of Organic Analitical Reagents 2nd Edition", CRC Press, 1992.
2) J. Patton and W. Reeder, "New Indicator for Titration of Calcium with (Ethylenedinitrilo) Tetraacetate", Anal. Chem., 1956, 28, 1026.
3) A. Itoh and K. Ueno, "Evaluation of 2-Hydroxy-1-(2-Hydroxy-4-Sulpho-1-Naphthylazo)-3-Naphthoic Acid and Hydroxynaphthol Blue as Metallochromic Indicators in the EDTA Titration of Calcium", Analyst, 1970, 95, 583.

よくある質問

Q NN指示薬を使用したCaの滴定方法を教えてください。: A

下記方法を参考にして下さい。

NN指示薬希釈粉末は、弊社にて「NN diluted with potassium sulfate」という名前でも販売しております。

＜試薬＞
・0.01M EDTA標準液
・NN指示薬希釈粉末
・約8N KOH溶液

＜操作＞
・中性の試料溶液50mlの緩衝剤として8N KOH 4mlをかき混ぜながらゆっくり加え(pH約13となる）
　ときどきかき混ぜ3～5分間放置する(Mgは水酸化物となって沈殿する）。
　次に必要があれば、妨害重金属のマスク剤として20％トリエタノールアミン溶液および
　10％チオグリコール酸溶液数滴とNN指示薬希釈粉末約0.1gを添加し、EDTA標準液で滴定する。
　終点の変色は　赤→青
　　0.01M EDTA 1ml = 0.4008mg Ca

＜備考＞
・Mg共存下のCaを選択的に滴定することは非常に応用範囲の広い分析法であるが、Mgの共存量が多くなると
　Ca2+の一部がMg(OH)2の沈殿に吸着されるため負の誤差を生じる傾向があり、この場合には次の滴定法を
　もちいるとその誤差を小さくすることが出来る。
　§まず試料溶液の一部につき上記操作にしたがって滴定を行い、EDTA標準液の概略の消費量を知る。
　§次に同量の試料溶液をとり、まずはじめに消費予想量よりわずか少なめのEDTA標準液をビュレットから
　　滴下する。
　§8N KOH溶液(必要があればマスク剤）およびNN指示薬を加え、終点に達するまで引き続き滴定する。
　　第２回目の滴定値は正しい値を示す。
　　　すなわち、この方法によるときはCa2+の大部分がEDTAとあらかじめキレート化合物を生成しているので
　　KOHを加えてMg(OH)2が沈殿する際にもCa2+の吸着が最小限に留められる。
　　　あるいは、この変法としてCa標準液による逆滴定も有効である。すなわち、試料溶液に対し、一定過剰の
　　EDTA標準液を加えた後、8N KOH溶液でpH13とし、しばらく放置してからNN指示薬を用いCa標準液で逆滴定する。
　　この場合、EDTA共存下にMg(OH)2が沈殿するので、Ca2+の吸着が抑えられる。
　　　しかしながら、これらの方法によってもCaの5倍(重量)以上のMgが共存する場合は精度が著しく低下する。
　　このような場合は次に述べるようにMg(OH)2の再沈殿を行えば、Caの20倍のMgが共存しても正確な結果がえられる。

・Mg(OH)2の沈殿生成を防ぐため、補助キレート試薬として酒石酸などを添加してEDTAと反応しない状態でMgの
　弱いキレート化合物を生成させておくのも一つの方法である。たとえば、Mg50mgに対し酒石酸200mgを
　添加すれば有効である。この際、滴定試薬としてのEDTAの変わりにGEDTAをもちいれば終点は更に明瞭になる。

・Mg(OH)2の沈殿に指示薬色素が吸着され変色が見にくい場合には、ゼラチンやポリビニルアルコール溶液を
　少量添加すると色素の吸着をおさえられる。また、Mg(OH)2の沈殿の量が多くなると終点での変色に色戻りの
　現象が起こる。この場合は青色が数秒間続く点を終点とする。

・滴定のpHが12より低くなるとMg2+の一部が滴定にかかって正の誤差を生じる。またKOHの代わりにNaOHを
　もちいても良いが、KOHをもちいるほうが指示薬の呈色は鮮やかである。

・重金属、殊にCu2+,Ni2+,Co2+,Fe3+,Al3+の共存は避けなければならない。重金属に対する各種マスク剤の
　能力は別途お問い合わせいただきたい。大量のFe3+はトリエタノールアミンでマスクしても、NN指示薬が
　酸化されるので良い結果が得られない。
　沈殿や抽出により妨害イオンを除去することも出来る。たとえば、Fe,Mn,Cuなどをオキシン,
　ジエチルジチオカルバミン酸ナトリウムあるいはクペロンで抽出することにより大量の妨害金属を除去することができる。

・陰イオンのうちPO43-はアルカリ性溶液中で難溶性のリン酸カルシウムを生成するため妨害をおこす。
　共存を許される濃度は試料溶液中のCa2+の濃度によって異なり、Ca濃度の低いほど多量のPO43-の共存が
　許される。たとえば試料溶液70ml中の0.1,1,10mgのCa2+を含む場合、Pとしてそれぞれ3mg,1mg,0.5mgの
　PO43-を含んでも差し支えないといわれる。
　多量のPO43-を含む場合はイオン交換法、溶媒抽出法あるいは沈殿などによってあらかじめ除去しておく
　必要がある。

・従来この目的にはMX指示薬(ムレキシド）がもちいられたが、終点の変色が不明瞭なうえ滴定値がpHの
　影響をうけやすいので現在はほとんどもちいられていない。しかしながら光度滴定法によれば
　微量のCaを滴定する事ができる。

・カルセインもpH12におけるCa滴定の指示薬としてもちいられる。特にCaによる逆滴定法はPO43-による妨害を
　うけることが少なく、PO43-と共存するCa2+の定量法として常用されている。すなわち酸性試料に過剰の
　EDTA標準液を加え、次に8N KOHを加えてpH12～13となし、カルセインを指示薬としてCa標準液で
　逆滴定する。十分純粋なカルセインはKOHアルカリ溶液中では直接滴定の終点において完全に蛍光が
　消失するので、補助色素をもちいなくとも蛍光の消失点によって終点が定められ、着色した試料にも
　応用できる。

・ヒドロキシナフトールブルー(HNB)も同様の条件で指示薬としてもちいることができる。
　視覚滴定によるときは変色の鋭敏性はNN指示薬と大差ないが、光度滴定ではより鋭敏な変色曲線を示す。

＊「キレート滴定」上野景平著（南江堂出版）より

取扱条件

規格
性状：	本品は、黒紫色粉末で水、エチルアルコール、メチルアルコールに溶けにくい。アルカリ溶液に溶ける。
アルカリ溶状：	試験適合
吸光度：	0.600～0.800 (555 nm付近)
強熱残分(硫酸塩)：	0.20％以下
鋭敏度：	試験適合
IRスペクトル：	試験適合

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