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Fluo 3-AM
Fluo 3-AM
- 細胞内蛍光プローブ
細胞内カルシウムイオン測定試薬
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製品コードF023 Fluo 3-AM
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CAS番号121714-22-5
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化学名1-[2-Amino-5-(2,7-dichloro-6-acetoxymethoxy-3-oxo-9-xanthenyl)phenoxy]-2-(2-amino-5-methylphenoxy)ethane-N,N,N’,N’-tetraacetic acid,tetra(acetoxymethyl)ester
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分子式・分子量C51H50Cl2N2O23=1129.85
| 容 量 | メーカー希望 小売価格 |
富士フイルム 和光純薬 |
|---|---|---|
| 1 mg | ￥39,400 | 343-08061 |
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マニュアル
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プロトコル
蛍光で細胞内 Ca を測定したい 
技術情報
溶解例
1 mg/0.5 mL（アセトニトリル）、1 mg/mL（ジメチルスルホキシド）
参考文献
1) A. Minta, J. P. Y. Kao and R. Y. Tsien, "Fluorescent Indicators for Cytosolic Calcium Based on Rhodamine and Fluorescein Chromophores", J. Biol. Chem., 1989, 264(14), 8171.
2) J. P. Kao, A. T. Harootunian and R. Y. Tsien, "Photochemically Generated Cytosolic Calcium Pulses and Their Detection by Fluo-3", J. Biol. Chem., 1989, 264, 8179.
3) M. Eberhard and P. Erne, "Kinetics of Calcium Binding to Fluo-3 by Stopped-Flow Fluorescence", Biochem. Biophys. Res. Commun., 1989, 163, 309.
4) A. Hernandez-Cruz, F. Sala and P. R. Adams, "Subcellular Calcium Transients Visualized by Confocal Microscopy in a Voltage-clamped Vertebrate Neuron", Science, 1990, 247, 858.
5) A. H. Cornell-Bell, S. M. Finkbeiner, M. S. Cooper and S. J. Smith, "Glutamate Induces Calcium Waves in Cultured Astrocytes: Long-Range Glial Signaling", Science, 1990, 247, 470.
6) D. A. Williams, "Quantitative Intracellular Calcium Imaging with Laser-scanning Confocal Microscopy", Cell Calcium, 1990, 11, 589.
7) D. A. Williams, S. H. Cody, C. A. Gehring, R. W. Parish and P. J. Harris, "Confocal Imaging of Ionised Calcium in Living Plant Cells", Cell Calcium, 1990, 11, 291.
8) P. A. Vandenberghe and J. L. Ceuppens, "Flow Cytometric Measurement of Cytoplasmic Free Calcium in Human Peripheral Blood T Lymphocytes with Fluo-3, A New Fluorescent Calcium Indicator", J. Immunol. Methods, 1990, 127, 197.
9) 河内秀幸, 南川哲寛, 高松哲郎, "高速走査共焦点レーザ顕微鏡による心室筋対細胞間のカルシウム波伝播の解析", 心筋の構造と代謝, 1991, 13, 63.
10) M. Iino, H. Kasai and T. Yamazawa, "Visualization of Neural Control of Intracellular Ca2+ Concentration in Single Vascular Smooth Muscle Cells in situ", EMBO J., 1994, 13 (21), 5026.
11) M. E. Dailey and S. J. Smith, "Spontaneous Ca2+ Transients in Developing Hippocampal Pyramidal Cells", J. Neurobiol., 1994, 25(3), 243.
12) M. Burnier, G. Centeno, E. Burki and H. R. Brunner, "Confocal Microscopy to Analyze Cytosolic and Nuclear Calcium in Cultured Vascular Cells", Am. J. Physiol., 1994, 266, C1118.
13) E. Donnadieu and L. Y. W. Bourguignon, "Ca2+ Signaling in Endothelial Cells Stimulated by Bradykinin: Ca2+ Measurement in the Mitochondria and the Cytosol by Confocal Microscopy", Cell Calcium, 1996, 20 (1), 53.
14) M. Ikeda, H. Ariyoshi, J. Kambayashi, K. Fujitani, N. Shinoki, M. Sakon, T. Kawasaki and M. Monden, "Separate Analysis of Nuclear and Cytosolic Ca2+ Concentrations in Human Umbilical Vein Endothelial Cells", J. Cell. Biochem., 1996, 63 (1), 23.
15) J. E. Merritt, S. A. McCarthy, M. P. A. Davies and K. E. Moores, "Use of fluo-3 to Measure Cytosolic Ca2+ in Platelets and Neutrophils Loading Cells with the Dye, Calibration of Traces, Measurements in the Presence of Plasma, and Buffering of Cytosolic Ca2+", Biochem. J., 1990, 269, 513.
よくある質問
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Q
細胞内カルシウム測定試薬は何種類かありますが、どのように選べばよいのでしょうか？
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A
測定機器や測定波長などで選ばれることが多いようです。
製品名の後ろに[-AM]が付いているものは細胞膜透過型になります。
それぞれの試薬の特性は【Fura 2】
・2励起1蛍光
励起(λex= Ca:340 nm, Ca free:380 nm)、蛍光：λem=500 nm
・解離定数：224 nmol/L
・蛍光強度比での測定が出来るので、誤差要因の補正を行なうことが出来る。
=>細胞内Ca濃度の計算が行ない易い。
・最も多く使用されている。
・励起フィルターを切替えなくてはいけないので、切替え間のタイムロスがある。
（機器の性能にもよる）【Fluo 3】
・1励起1蛍光
励起：λex=508 nm、蛍光：λem=527 nm
・解離定数：400 nmol/L
・励起波長が長波長側にあるので細胞に与える障害が少ない
（NADH,NADPHの影響が出ない）
・Arレーザーによる励起装置が使用出来る。
・スライス標本には適さない
（Fluo3がスライス表面の死んだ細胞に結合するのか、細胞外のカルシウム濃度を測定する）【Fluo 4】
・1励起1蛍光
励起：λex=495 nm、蛍光：λem=518 nm
・解離定数：360 nmol/L
・Fluo3よりも蛍光強度が強い。
・励起波長が長波長側にあるので細胞に与える障害が少ない
（NADH,NADPHの影響が出ない）
・Arレーザーによる励起装置が使用出来る。
・Fluo3よりも細胞毒性がでやすい。【Indo 1】
・1励起2蛍光
励起：λex= 330 nm、蛍光(λem= Ca:410 nm, Ca free:485 nm)
・解離定数：250 nmol/L
・励起波長の切替えの必要がないので、非常に早い速度のCa濃度変化や心筋細胞の
ような動きの試料も測定できる（但し、検出器は2台必要）【Rhod 2】
・1励起1蛍光
励起：λex=553 nm、蛍光：λem=576 nm
・解離定数：1.0 μmol/L
・励起波長が長波長側にあるので細胞に与える障害が少ない
（NADH,NADPHの影響が出ない）
・Arレーザーによる励起装置が使用出来る。【Quin 2】
・1励起1蛍光
励起：λex=339 nm、蛍光：λem=492 nm
・解離定数：110 nmol/L
・一番最初に開発されたプローブ
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Q
はじめて測定します。Ca2+プローブの原理や測定方法、トラブルシューティング法を分かり易く教えて下さい。
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A
はじめて細胞内Ca2+測定をされる方を対象としたプロトコルを作成しております。
原理、Ca2+プローブの特徴、測定方法、トラブルシューティングの方法等を記載しておりますので、ご参照下さい。下記リンクよりダウンロード可能です。
「はじめて細胞内Ca2+を測定する方へ －カスタマーサポート担当者の視点から－」
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Q
Caの変化をフローサイトメトリーで測定したいと思っています。 どの試薬を使えばよいでしょうか？
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A
フローサイトメトリーでは、励起波長が固定されておりますので、1波長励起タイプのものが望ましいと思われます。
まず、Indo 1(UV laser, 365 nm)やFluo 3(Ar-laser, 488 nm)をお試しください。
・Indo 1はカルシウムの結合によって蛍光波長が変化するメリットがあります。
・Fluo 3は励起光源としてArレーザーを利用できます。実際の使用例としては、
[Indo 1]
P. S. Rabinovitch, et al., Journal of Immunology, 137, 952 (1986).
[Fluo 3]
S. W. Sherwood and Robert T. Schimke, Methods Cell Biol., 46, 77 (1995).
がございます。ご参照ください。
取扱条件
| 性状： | 本品は、赤色粉末又は固体で、ジメチルスルホキシド及びアセトニトリルに溶ける。 |
|---|---|
| 純度(HPLC)： | 85.0% 以上 |
| アセトニトリル溶状： | 試験適合 |
| 蛍光スペクトル： | 試験適合 |
| NMRスペクトル： | 試験適合 |
| 1.保存方法：冷凍,遮光 |
