Rhod 2-AM

04 細胞内蛍光プローブ

Rhod 2-AM

• 細胞内蛍光プローブ

カルシウムイオン測定試薬

• 製品コード
  R002　 Rhod 2-AM
• CAS番号
  145037-81-6
• 化学名
  1-[2-Amino-5-(3-dimethylamino-6-dimethylammonio-9-xanthenyl)phenoxy]-2-(2-amino-5-methylphenoxy)ethane-N,N,N’,N’-tetraacetic acid, tetraacetoxymethyl ester, bromide
• 分子式・分子量
  C₅₂H₅₉BrN₄O₁₉=1123.94

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マニュアル

Q

細胞内カルシウム測定試薬は何種類かありますが、どのように選べばよいのでしょうか？

A

測定機器や測定波長などで選ばれることが多いようです。
製品名の後ろに[-AM]が付いているものは細胞膜透過型になります。
それぞれの試薬の特性は

【Fura 2】
・2励起1蛍光
　　励起(λex= Ca:340 nm, Ca free:380 nm)、蛍光：λem=500 nm
・解離定数：224 nmol/L
・蛍光強度比での測定が出来るので、誤差要因の補正を行なうことが出来る。
=>細胞内Ca濃度の計算が行ない易い。
・最も多く使用されている。
・励起フィルターを切替えなくてはいけないので、切替え間のタイムロスがある。
　（機器の性能にもよる）

【Fluo 3】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=508 nm、蛍光：λem=527 nm
・解離定数：400 nmol/L
・励起波長が長波長側にあるので細胞に与える障害が少ない
　（NADH,NADPHの影響が出ない）
・Arレーザーによる励起装置が使用出来る。
・スライス標本には適さない
　（Fluo 3がスライス表面の死んだ細胞に結合するのか、細胞外のカルシウム濃度を測定する）

【Fluo 4】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=495 nm、蛍光：λem=518 nm
・解離定数：360 nmol/L
・Fluo3よりも蛍光強度が強い。
・励起波長が長波長側にあるので細胞に与える障害が少ない
　（NADH,NADPHの影響が出ない）
・Arレーザーによる励起装置が使用出来る。
・Fluo 3よりも細胞毒性がでやすい。

【Indo 1】
・1励起2蛍光
　　励起：λex= 330 nm、蛍光(λem= Ca:410 nm, Ca free:485 nm)
・解離定数：250 nmol/L
・励起波長の切替えの必要がないので、非常に早い速度のCa濃度変化や心筋細胞の
　ような動きの試料も測定できる（但し、検出器は2台必要）

【Rhod 2】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=553 nm、蛍光：λem=576 nm
・解離定数：1.0 μmol/L
・励起波長が長波長側にあるので細胞に与える障害が少ない
　（NADH,NADPHの影響が出ない）
・Arレーザーによる励起装置が使用出来る。

【Quin 2】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=339 nm、蛍光：λem=492 nm
・解離定数：110 nmol/L
・一番最初に開発されたプローブ

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Q

はじめて測定します。Ca²⁺プローブの原理や測定方法、トラブルシューティング法を分かり易く教えて下さい。

A

はじめて細胞内Ca²⁺測定をされる方を対象としたプロトコルを作成しています。
原理、Ca²⁺プローブの特徴、測定方法、トラブルシューティングの方法等を記載しておりますので、ご参照下さい。

下記リンクよりダウンロード可能です。

「はじめて細胞内Ca²⁺を測定する方へ　－カスタマーサポート担当者の視点から－」