PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒（抗小鼠IgG POD）

培养物上清的外泌体定性·定量分析

◆特点

采用PS结合分子Tim4包被板

●　通过磷脂酰丝氨酸（PS）结合分子进行捕捉。^※1

●　可检测出0.1μL培养上清液细胞外囊泡。

●　用纯化细胞外囊泡为标准品^※2进行定量检测。

●　可通过WB法^※3进行50～1,000倍高灵敏度检测。

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培养上清的细胞外囊泡高灵度定性·定量检测

※1比通过抗体包被板ELISA法能更好进行外囊泡的定性·定量分析。

※2请使用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS获得外囊泡标准品。

※3WB法：免疫印迹实验

最优化试剂盒

●　最优化对照用一抗^※4

●　最优化检测用二抗^※5

●　采用显色法

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操作简便，实验重复性高

※4附加抗人CD63抗体。检测其他表面标记蛋白可利用任意小鼠单抗。

※5附加抗小鼠IgG抗体-HRP标记。

 

◆测定原理·产品概述

本试剂盒含有细胞培养上清和体液样品纯化外囊泡定性分析，以及细胞上清样品外囊泡定量分析作用的酶联免疫测定试剂。将能与外囊泡表面的磷脂酰丝氨酸（PS）特异性结合的蛋白包被到板上，细胞外囊泡与其反应固定后，用任意外囊泡表面标记蛋白的小鼠单抗作为检测一抗，试剂盒的HRP标记小鼠IgG抗体为二抗，可高灵敏度检测表面具有任意标记蛋白的细胞外囊泡。另外，试剂盒含有作为控制组检测一抗的抗人CD63小鼠单抗，可检测出人CD63阳性外囊泡。 　　通过MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS（Code No.: 293-77601）提纯细胞培养上清和体液样品中的外囊泡，通过本试剂盒对细胞外囊泡的表面标记蛋白进行免疫印迹实验，可50～1,000倍高灵敏度且简便进行检测。另外，从细胞上清中利用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS获得外囊泡作为标准品，可对细胞上清外囊泡进行定量分析。

◆试剂盒组成

试剂盒组成（96次）	包装
捕获外泌体96孔板	1个(8well×12strips)
反应/洗涤缓冲液（10×）	50mL×2瓶
外泌体结合增强子（100×）	10mL×1瓶
对照一抗Anti-CD63（100×）	120μL×1瓶
二抗HRP缀合抗小鼠IgG（100×）	120μL×1瓶
TMB溶液	12mL×1瓶
终止液	12mL×1瓶
封板膜	4个
说明书	1本

 

◆案例

各种细胞培养上清纯化外囊泡定性分析

　　将各种细胞获得的纯化外囊泡1ng添加至板孔中，利用能检测表面标记蛋白CD9/CD63/CD81的一抗通过本试剂盒对各表面标记量进行定性比较。

　　另外，作为比较参考数据，将各细胞纯化150ng外囊泡进行电泳，利用能检测表面标记的CD9/CD63/CD81的一抗对各表面标记蛋白量进行定性分析。

ELISA系统和WB分析之间，已确认标记蛋白表达模式具有相关性！！

 

正常人血清纯化细胞外囊泡的定性分析

　　将从正常人血清的6个样品纯化的细胞外囊泡，通过BCA检测外囊泡膜上的蛋白浓度。分别添加40、20、10ng到孔中，用可识别表面标记CD63的对照组检测一抗测定OD值进行定性比较。

使用从体液样品纯化的细胞外囊泡具有良好的线性！！

 

细胞培养上清纯化细胞外囊泡的检测灵敏度参考数据

　　COLO201细胞培养上清纯化外囊泡，比较本试剂盒和免疫印迹实验的检测灵敏度。

免疫印迹实验和ELISA的检测灵敏度比较

　　（a），（b）使用各种抗CD63抗体（其他公司产品，Wako产品：Code No. 012-27063）进行免疫印迹实验检测灵敏度数据

　　样品：COLO201细胞培养上清纯化外囊泡（使用MagCapture^™ Exosome Isolation Kit PS纯化）

　　★：各抗体免疫印迹实验的检测限。

　　（c）Exosome ELISA Kit检测限数据

　　用本试剂盒对COLO201细胞源纯化外囊泡（使用MagCapture^™ Exosome Isolation Kit PS纯化）进行梯度稀释的样品以及缓冲液的空白值进行测定，制作COLO201标准曲线。利用此标准曲线可算出COLO201源纯化样品的最低检测灵敏度。（测定各浓度点n=6，空白点n=12）

　　比免疫印迹实验可高灵敏度检测标记蛋白。

细胞培养上清样品的稀释线性（Linearity）参考数据

　　COLOC201细胞培养上清纯化外囊泡为标准品制作标准曲线，以COLO201细胞培养上清5个梯度稀释样品（1:100-1:1600）进行稀释线性进行评估。

COLO201细胞培养上清
CM量 （μL）	稀释		测定值 （ng/mL）	期望值 （ng/mL）	预期百分比
	比率	稀释因子（×）
0.0625	1：1600	0.000625	0.89	0.91	98.4
0.125	1：800	0.00125	1.82	1.72	105.6
0.25	1：400	0.0025	3.44	3.52	97.8
0.5	1：200	0.005	7.04	6.78	103.9
1	1：100	0.01	13.6	—	—

　　标准品：COLO201细胞源外泌体

　　（使用MagCapture^™ Exosome Isolation Kit PS纯化）

　　测定样品：COLO201细胞培养上清

　　一抗：试剂盒附带抗CD63抗体

　　良好的稀释线性，已确认可检测0.1μL培养上清的细胞外囊泡。 

相关产品

　　可代替超速离心法纯化标准高纯度细胞外囊泡。

产品编号	产品名称	保存	包装
293-77601	MagCapture™ 外泌体提取试剂盒PS MagCapture™ Exosome   Isolation Kit PS	2-10℃	10次*1

　　*1 所使用的磁珠可重复再利用4次。内附充足缓冲液。若同一样品反复提取及不会发生污染的情况下，最多可使用50次。

血清、血浆样本，或其他物种中外泌体直接ELISA，请点击：

PS Capture™外泌体ELISA Kit （链霉亲和素HRP）

更多应用说明，请点击：

新型亲和性外泌体纯化法与外泌体高灵敏度检测应用

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MagCapture^™ 外泌体提取试剂盒

Wako外泌体相关抗体CD63单克隆抗体

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Wako 外泌体册子

和光外泌体ELISA试剂盒宣传页

和光外泌体ELISA试剂盒说明书

Q&A

Q1	标准品必须要制备吗？Wako的MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS都必须使用吗？
A1	定量测定时，请制备外囊泡标准品。超速离心法和多聚体沉淀法等方法纯化的外囊泡也可作为标准品，但在测定时还是推荐PS亲和法纯化的外囊泡作为标准品。（详细请参考说明书）
Q2	为什么没有附带的标准品？
A2	每种细胞的表面标志蛋白质种类和含量存在差异，标准品和测定样品的来源细胞必须统一。因此本试剂盒未附加标准品，请制备与样品同一来源细胞培养上清的标准品。
Q3	血清、血浆样品可直接测定吗？
A3	因为本试剂盒附带的检测二抗显示与人，小鼠、大鼠IgG非特异性反应，不推荐人，小鼠、大鼠血清、血浆直接使用。但是，用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS从血清、血浆纯化外囊泡可定性分析，另外，超速离心法和多聚体沉淀法等方法纯化的外囊泡也可做定性分析。
Q4	细胞培养上清可直接测定吗？
A4	试剂盒附带的检测二抗不与牛IgG发生非特异性反应，不仅无血清培养基，而且FBS添加培养基的细胞培养上清也可直接测定。可定量和定性分析细胞培养上清样品中的外囊泡。
Q5	可以变更一抗吗？
A5	可以。请选择想检测的表面标记的小鼠抗体。请根据说明书研究最适浓度。
Q6	有推荐的检测一抗吗？
A6	以下抗体均为本公司通过ELISA确认的抗体。 Anti CD9 for Exosome Isolation（Cosmo Bio Cat. NO.CAC-SHI-EXO-M01-50UL） Anti CD81 for Exosome Isolation（Cosmo Bio Cat. NO.CAC-SHI-EXO-M03-50UL) Anti CD63, Monoclonal Antibody (3-13)（Wako Cat. NO.012-27063） Anti CD63, Monoclonal Antibody (3-13)（Wako Cat. NO.016-27061）