miRNA研究专题

　　Wako提供miRNA从分离、克隆到靶基因功能研究的一系列试剂盒。

　　列表中的产品仅仅用于实验室研究，不能作为药物、食物或人的使用。

◆简便高效的microRNA分离试剂盒——microRNA Isolation Kit

  产品编号：291-70201

　　microRNA Isolation Kit可同时分离出miRNA和及其靶基因mRNA，操作简单。分离得到的Ago IP RNA fraction，可用于miRNA和靶基因mRNA的克隆、定量和表达谱分析。

◆高效的miRNA克隆——microRNA Cloning Kit Wako

   产品编号：290-66501

●　高效率克隆microRNA

●　可克隆具有二级结构的microRNA

●　重复性好。

◆miRNA靶基因mRNA的克隆—— Target mRNA Cloning Kit Wako

  产品编号：298-68001

　　miRbase中miRNA的数目已经达到10883，但是miRNA已知的靶序列mRNA却很少， 而miRNA的靶序列研究也是其功能研究一个重要部分，由于miRNA与其靶mRNA存在不完全配对，对计算机预测造成困难。

　　miRNA、靶mRNA和Ago蛋白会以复合物RISC形式存在，本试剂盒通过从细胞中分离得到的RISC复合物中，直接有效的克隆特定miRNA的靶序列mRNA，可作为miRNA靶序列的新发现与筛选的有力工具。

特点

●　用于扩增微量 mRNA

●　可直接从Ago IP RNA片段中克隆mRNA，用于microRNA 靶基因的研究

靶序列mRNA的cDNA克隆实验路线图：

               

◆PCR反应的纯化试剂盒——PCR  Purification Kit Wako

  产品编号：298-67901

　　不需要使用凝胶试剂盒回收纯化，可通过PCR  Purification Kit Wako直接去除PCR扩增后DNA反应液中含有的引物、引物二聚体、dNTP、酶类如DNA聚合酶和限制内切酶等物质，操作简单，纯化后DNA溶液可用于限制酶处理、Southern杂交、标记，克隆，测序，体外转录等实验。

miRNA试剂盒（Wako）的应用：（miR-122 targeted mRNA的研究）

实验总路线图：

①　扩增到cDNA电泳检测

　　结果显示：可以从Ago IP RNA片段中成功的扩增到cDNA.

②　扩增后的cDNA的克隆

　　miR-122的潜在靶序列的cDNA克隆 ，然后通过在线软件如TargetScan 4.2对获得序列是否是靶序列进行评分。

　　※ 1. CSP：Context Score Percentile

　　靶序列mRNA的合理参数值

　　※ 2.对照细胞

　　转染了GL3（荧光素酶）siRNA的HepG2细胞

③　靶序列 mRNA 的鉴定（ qRT-PCR）

　　mRNA的定量（CSP※1 of Clone ≧ 80）

　　其中ALDOA mRNA已经证实是miR-122的靶基因，此外，通过此方法发现了很多新的miR-122潜在的靶序列。

Target mRNA Cloning Kit	A useful approach to total analysis of RISC-associated RNA
298-67901	298-68001

参考文献：

Hayashida, Y., et al . A useful approach to total analysis of RISC-associated RNA., BMC Research Notes , 2, 169（2009）