SLP肽聚糖检测试剂

SLP Reagent Set

 

◆原理

        蚕（Bombyx mori）的体液内存在着被称为酚氧化酶的生化前体酚氧化酶级联的躯体防御机能，通过肽聚糖（PG）以及（1→3）-β-D-葡聚糖（β-葡聚糖）获得反应，最终使苯酚氧化酶（PO）活性化。经推测PO活性化机制是包含复数丝氨酸蛋白酶活化性的级联机制，但至今没有获得证实。目前认为该级联机制在异物侵入时于昆虫体内为识别黑色素形成担当着重要的角色。

       SLP试剂用蚕的体液无菌提取调制而成，是包含酚氧化酶级联全部遗传因子的冻干品。本试剂通过PG以及β-葡聚糖得到活性化，并氧化包含反应底物的DOPA（L- 3,4-二羟基），从而生成黑色素。由于PG大部分是细菌细胞壁、β-葡聚糖也可被多种真菌细胞壁识别，以生成的黑色素作为指标，可检测出各种微生物。

       SLP试剂的活性化机制如图1所示。换言之，通过PG或是β-葡聚糖与各种各样的识别蛋白（PGRP与βGRP）结合，酚氧化酶级联发生反应，最终使得PO被活性化。活性化后的PO氧化底物中的DOPA最终生成黑色素。能被鲎血球提取物（鲎试剂）检测出的内毒素虽不能使SLP的级联机制活性化，但无法被鲎试剂检测出的PG却能被SLP试剂检测出来。

       SLP试剂虽然会对来源于各类细菌的PG和带有β-1,3-糖苷键的β-葡聚糖产生强烈反应，但对以革兰氏阴性细菌细胞壁作为成分的脂多糖却几乎不反应。

 

 

 

       不仅仅是革兰氏阳性细菌，PG里也存在着革兰氏阴性细菌。不管是阳性还是阴性的革兰氏细菌，SLP试剂对广泛的一般细菌均产生反应。此外，也会对真菌来源的β-葡聚糖起反应，因此认为SLP试剂可作用于所有微生物。根据以上这些，我们认为把能对内毒素以及β-葡聚糖起反应的鲎试剂与SLP试剂合并使用，可以对检测材料中的微生物种类进行预测。

 

◆优点・特色

 

● 可高精度测量肽聚糖和β-葡聚糖。

● 无需特殊检测装置，仅用视觉判断即可测量。

● 采用酶标仪和并列的比浊时间分析装置Toxinometer^®可更高精度和高感度肽聚糖和β-葡聚糖的定量数值。

● 本产品于2~10℃温度下冷藏可保存18个月以上。

 

◆案例・应用

● 研究阐明肽聚糖的组织活性相关、生物合成、代谢、病因生成等

● 作为水质污染的指标

● 人工透析液的微生物污染对策

● 医药制品、生物制剂、遗传因子工学制成品等的菌体混入的测出。

● 昆虫活体防御反应结构的研究

 

 

■测定方法

       在使用了SLP的前提下，PG以及β-葡聚糖均可被Toxinometer^® 法、酶标仪法、视觉判断法测出。

       在Toxinometer^®和酶标仪中，随着活性化生成的色素量掌握吸光度的变化、直到吸光度达到预先设置好的频率为止的反应时间作为活性化时间（Ta或称onset time），Ta可作为指标定量SLP活性化物质（PG和β-葡聚糖）。关于原理，采用Toxinometer^®法的测定事例可见图4，采用酶标仪的测定事例请参见图5。

 

       在视觉判断法中，让其反应一定时间后，通过观察反应液中颜色的变化进行判定。这个方法和在鲎试剂中凝胶化倒转法是一样的，但由于只需要通过反应液的颜色变化进行判定而相对简单，还有不受震动的影响等而具有优势。

 

 

● 什么是内毒素

● 内毒素检测——鲎试剂的选择方法

 

【说明书】

SLP Reagent Set	SLP-HS Single Reagent Set SLP-HS

【内容】

●SLP试剂套装

1.SLP试剂
1试管 3mL用
灵敏度：使用视觉判断法求得终点，标记在每批次上。

2.底物试剂
1管 3mL用
含有DOPA

3.底物溶解液１
1管 3mL用
含有优质缓冲液

●SLP-HS单品试剂套装

1.SLP-HS(Silkworm Larvae Plasma High Sensitive)
0.2mL用 × 20管
灵敏度 :
10pg/mL (PG)
1pg/mL (凝胶多糖碱溶解液)
（用Toxinometer® (30℃)于100分钟内检验出）

2.SLP-Diluent
1.0mL用 × 20管
3.Standard(Digested Peptidoglycan from S.aures)
0.5mL用 × 1管

【标准品线性测试及反应时间】

 

【相关产品】

产品编号	产品名称	标准	容量
030-09903	凝胶多糖 (※1) Curdlan	生化用	1g
162-18101	肽聚糖 (※2) Peptidoglycan	生化用	2mL
(※1):(1→3)-β-D-葡聚糖 (※2):SLP试剂套装用、含有1µg/mL来源于Micrococcus luteus的肽聚糖

 

◆ 参考文献

1. Ashida, M. and Yamazaki, H. I., Biochemistry of the phonoloxidase System in Insects: with Special

    Reference to Its Activation. ''Molting and Metamorphosis,''et. by Onishi, E. and Ishizaki, H., Japan

    Sci. Soc. Press, Tokyo, pp239-265 (1990).

2. Tsuchiya, M., Kobayashi, F., Asahi, N., Yokota, A., and Matsuura, S., Reactivities of Gram-negative

    bacteria and Gram-positive bacteria with Limulus amebocyte lysate and silkworm larvae plasma.,

    J. Endotoxin Res., 1 (suppl. 1), 70 (1994).

3. Tsuchiya, M., Asahi, N., Suzuoki, F., Ashida, M., and Matsuura, S., Detection of peptidoglycan and

    beta-glucan with silkworm larvae plasma test., FEMS Immunol. Med. Microbiol., 15, 129-134 (1996).