廉价的高性能基因导入试剂

ScreenFect ™ 通信 向HeLa细胞导入siRNA数据

 

下面为大家介绍使用ScreenFect ™ siRNA向HeLa细胞导入siRNA数据的实验成果及逆转染（1-STEP）Protocol。

◆向HeLa细胞的逆转染例子（24孔培养板）

细胞的前期培养

1.     用适当的培养容器（T-75烧瓶），将HeLa细胞培养至半融合状态。

配制转染试剂

1.     准备两支1.5 mL灭菌试管。

2.     在其中一支试管里加入24.5 μL ScreenFect ™ Dilution buffer。

3.     再往步骤2的试管里加入0.5 μL的ScreenFect ™ siRNA reagent，

        使全部容量达到25 μL。…溶液（A）

      （ScreenFect ™ siRNA reagent在使用前进行涡旋处理。）

4.     在另一支试管里加入24 μL ScreenFect ™ Dilution buffer。

5.     再向步骤4的试管里加入1 μL的5μmol/L PIK3CB siRNA溶液（5 pmol）…溶液（B）

6.     将溶液（B）全部添加至溶液（A）的试管中。

7.     轻敲试管，使溶液混合均匀。再用台式离心机降速处理。

8.     在室温下孵浴5~20分钟。

配制配制细胞悬浮液

1.     从恒温箱里取出【细胞的前期培养】的烧瓶。

2.     去除培养基，用PBS清洗一次。

3.     向烧瓶里添加2 mL胰蛋白酶溶液后，放入室温、5%CO₂的恒温箱里培养，

        直到细胞从培养容器中脱落。

4.     加入约5 mL FBS添加培养基使反应停止。

5.     利用移液器使细胞分散，将全部培养液转移到离心管中。

6.     150×g离心，5分钟。

7.     去除上清时不要去掉颗粒物。

8.     添加5~10 mL新的培养基，利用移液器使细胞分散。

9.     用血细胞计数板等的细胞计算器检测细胞数。

10.  检测出细胞悬浮液的浓度后经过计算，以此配制2.0×10⁵ cells/mL的细胞悬浮液。

     （配制的细胞悬浮液量可根据实验规模进行适当地调节。）

转染

1.     将500 μL在【配制细胞悬浮液】时配制好的细胞悬浮液添加至细胞培养板里。

2.     将50 μL在【配制转染试剂】步骤8中孵浴的DNA-lipid complex添加至细胞培养板里，

        轻摇培养板使溶液混合（也可以先往细胞培养板里加入50 μL DNA-lipid complex，

        再加入500 μL细胞悬浮液）。

3.     放入CO₂的恒温箱里培养24~48小时后即可进行后续实验。

 

 

◆实验数据

　　用逆向转染法和正向转染法向HeLa细胞进行PIK3CB siRNA的导入实验，通过实时定量PCR检测出PIK3CB mRNA的表达量。将定量结果得出的敲减效率，与原来用其他公司的产品进行实验得出的敲减效率进行比较，结果显示，ScreenFect ™ siRNA拥有高于其他公司产品抑制目的基因表达的效率。

【逆向转染（1-STEP）】

【正向转染（2-STEP）】

◆产品列表

产品编号	产品名称	规格	包装
299-75001	ScreenFect ™ siRNA转染试剂 ScreenFect ™ siRNA	基因研究用	0.2 mL
295-75003			1 mL
293-75004			1 mL×5