mESF基础培养基/mESF添加物

用于小鼠ES细胞培养的无血清培养基

　　本产品是用于小鼠ES细胞培养的无血清培养基。只需在基础培养基中添加mESF添加物和LIF后即可进行小鼠ES细胞培养。使用时无需添加FBS或血清代替品，同时无需使用饲养层细胞。

◆产品

　　●　mESF基础培养基（编号No. 136-17805）

　　●　mESF添加物（编号No. 299-73301）

　　　　mESF Supplement A 5ml×1
　　　　mESF Supplement B 5ml×1（含有0.0078% 2-mercaptoethanol）

◆特点

　　●　无需FBS和血清代替品（无血清培养基）

　　●　无需饲养层细胞

　　●　低浓度LIF下也能维持未分化能力

◆使用方法

　　●　往mESF基础培养基全量加入各种mESF Supplement及LIF。

※注　直接将mESF从现在使用中的培养基移出时，成功移植细胞数量有可能性减少。因此，请播种比移植时更多的细胞。此外，若不擅长直接移植，请按照以下顺序进行驯化。

　　①播种细胞时，将使用中的培养基与mESF培养基以1:1的比例混合。

　　②在后面的移植阶段，将使用中的培养基与mESF培养基以1:3、 1:7的比例混合，依次增加mESF培养基的用量。

 

◆小鼠ES细胞D3细胞系的培养

　　使用本产品培养小鼠ES细胞D3细胞系传代至第5代，观察到细胞形态、细胞繁殖能力、未分化标记物。

◆细胞形态

　　观察到具有小鼠ES细胞特有光泽的细胞集落。

◆细胞繁殖曲线

 

　　使用本产品后的繁殖曲线如下图。

（培养基组成）
　　ｍESF基础培养基 + 各mESF Supplement + 1,000units/ml StemSure® LIF

（细胞播种数）

　　7,000cells/well　

（使用骨胶原蛋白涂层处理12孔板）　

◆观察到未分化标记物

　　各种未分化标记物（Nanog, Sox2, Oct3/4, SSEA-1）呈阳性。

 

 ◆低浓度LIF下的小鼠ES细胞D3细胞系培养

　　在低浓度LIF下（250, 500units/ml）培养了小鼠ES细胞D3细胞系。

◆集落形态（ALP染色）・细胞繁殖曲线

　　细胞形态及细胞繁殖曲线如下图。 

 

（培养基组成）

　　ｍESF基础培养基 + 各mESF Supplement + 250 or 500 or 1,000units/ml StemSure® LIF

（细胞播种数）

　　7,000cells/well　

（使用骨胶原蛋白涂层处理12孔板）　

◆ALP染色阳性集落形成率

　　任何LIF浓度下的集落ALP染色几乎都呈阳性。

 

◆相关产品

★StemSure^® 系列★

　　StemSure^®系列可用于ES细胞、iPS细胞培养。对每批小鼠ES细胞D3细胞系进行质量检测。

　　●StemSure^®D-MEM・巯基乙醇・硫代甘油

　　●StemSure^®血清代替品

　　●StemSure^®明胶溶液

　　●StemSure^®冷冻保存溶液

 

★培养基・细胞培养试剂★

　　本公司生产液体培养基以及平衡盐溶液、细胞剥离・分散溶液、抗生物质溶液、细胞外基质。<链接>

★ES・iPS细胞研究试剂★ 
 
　　2007年公布iPS细胞建立后，出现了大量关于iPS细胞的文献。在众多文献中，列出了有关ES细胞・iPS细胞的未分化能维持及分化诱导的低分子化学物。<链接> 

★LIF, 人类, 移植体, 培养上清液★

　　LIF对小鼠ES细胞分化有抑制作用，因此可在维持未分化状态下的ES细胞时使用。<链接>

★rBC2LCN-FITC★

　　rBC2LCN能够辨识未分化的人类ES・iPS细胞。可添加含有人类ES・iPS细胞的培养液，对未分化的活细胞进行染色。<链接>

 

◆参考文献

• Furue, M., et al.: In Vitro Cell Dev. Biol. Anim., 41, 19-28, (2005).

• Hayashi,Y., et al.: Stem Cells, 25, 3005-3015, (2007).