组织培养用胶原蛋白

Cellmatrix^® Series

　　Cellmatrix是作为组织培养胶原蛋白开发的。可简单再现各种需要使用胶原蛋白的培养方法。

◆优势、特色

Cellmatrix® Type I-A

●　猪腱由来，酸可溶性的Type-I胶原蛋白

●　浓度3.0mg/ml、pH3的无菌溶液

●　高凝胶强度，最适合胶原蛋白・凝胶包埋培养

●　凝胶的透明度高，容易显微镜观察

Cellmatrix^® Type I-C

●　猪皮由来的胃蛋白酶可溶化的Type-I胶原蛋白

●　浓度3.0mg/ml、 pH3的无菌溶液

●　低粘度，最适合包被

●　几乎不会凝胶化

Cellmatrix^® Type I-P

●　猪腱由来的胃蛋白酶可溶化的Type-I胶原蛋白

●　浓度3.0mg/ml、pH3的无菌溶液

●　粘性低、容易处理

●　形成凝胶

Cellmatrix^® Type Ⅲ

●　用胃蛋白酶处理猪皮精制的Type-Ⅲ胶原蛋白

●　浓度3.0mg/ml、pH3的无菌溶液

●　最适合包被

●　几乎不会凝胶化

Cellmatrix^® Type Ⅳ

●　用胃蛋白酶处理牛晶状体前囊精制的Type-Ⅳ胶原蛋白

●　低粘度、最适合包被

●　浓度3.0mg/ml、pH3的无菌溶液

●　不会凝胶化

◆应用

【Type I-A】

　　经胶原蛋白、凝胶包埋培养的小鼠乳腺癌细胞增殖形态

　　Cellmatrix Type I-A具有高凝胶强度

【Type I-P】

　　Cellmatrix Type I-P可形成比较软的凝胶

【Type I-C】

　　培养细胞的伸展活性

　　　　　

　未涂布　　　　　　　　涂布胶原蛋白

【相关资料】

Nitta-Gelatin Product Guide_en

胶原蛋白凝胶培养方法

事前准备

胶原蛋白凝胶上培养

胶原蛋白凝胶包埋培养

胶原蛋白涂层法

Q：    请告知明胶蛋白和明胶的差异。为什么明胶在4℃做凝胶，胶原蛋白在37℃做凝胶?

A：    明胶是胶原蛋白的变性产物，具体地说，胶原蛋白是三股螺旋缠绕的结构，分子量为30万道尔顿，经热等因

          素而被破坏，形成无规则线圈结构的蛋白质为明胶。

          所以明胶和胶原蛋白，一级结构（氨基酸组成）相同，二级结构不同。这个差异反映了胶原蛋白和明胶产生

          凝胶的条件差异。

          胶原蛋白保持三股螺旋缠绕的结构，在螺旋结构外侧排列着疏水性氨基酸——脯氨酸。胶原蛋白凝胶利用这

          个疏水性氨基酸，通过<温度高的一方，具有高结合力>疏水结合，制备明胶。

          而明胶二级结构被破坏，亲水性氨基酸在外侧排列，通过氢结合和离子结合制作凝胶。

          当温度高时，<氢结合力+离子结合力>克服明胶主链的热运动，不形成凝胶。但是，当变为低温时，<氢结合

          力+离子结合力>成为热运动力量，明胶形成凝胶。

  

 

Q：    用明胶凝胶是否能培养？

A：    用明胶凝胶不能培养。明胶凝胶在37℃的培养条件下不会形成凝胶，将会溶化。

          在组织培养液中，明胶的用途一般为：在培养皿中进行明胶涂层培养，或在明胶海绵上用福尔马林等进行桥

          联培养。

  

 

Q：    想购买胶原蛋白凝胶，是否有？

A：    以胶原蛋白溶液的状态作为商品销售。可根据附送的手册，进行胶原蛋白凝胶制作。

          请将Cellmatrix Type I-A作为胶原蛋白凝胶培养产品，进行订购。为第一次做胶原蛋白凝胶培养法的顾客，

          准备了制作凝胶所必须的试剂套装和胶原蛋白凝胶培养试剂盒。

  

 

Q：    为什么溶解于酸性溶液的胶原蛋白能进行培养？

A：    实际上，在胶原蛋白包埋细胞前，需要将酸性的胶原蛋白溶液调整成中性。

          调整后的胶原蛋白因为低温保持者溶液状态，以这个状态将细胞悬液混合到胶原蛋白溶液中。

          之后，将含有这个细胞的胶原蛋白溶液移到培养皿中，在37℃中加热，胶原蛋白以细胞包埋状态形成凝胶。

          这个就是胶原蛋白凝胶包埋培养法的制作方法。

          详细请参考在线手册。

  

 

Q：    Cellmatrix有很多的胶原蛋白种类，应该选哪个才好？

A：    根据目的不同，变化使用的种类。

          根据主要目的，将产品系列分成如下种类，请参考。

          胶原蛋白凝胶培养试剂盒、Cellmatrix Typr I-A、Cellmatrix TypeI-P适合胶原蛋白凝胶培养法。

          其他的Cellmatrix（Cellmatrix Type I-C，III，IV）不能进行胶原蛋白凝胶培养。

          Cellmatrix Type I-C适合标准的涂层培养法——胶原蛋白涂层培养法。请根据客人实验的细胞及方法，考虑

          最适合的Cellmatrix ，实验性地考虑其他类型的胶原蛋白。例如，软骨细胞使用Cellmatrix Type II等，表皮

          细胞使用Cellmatrix Type IV等。

 

  

Q：    为何胶原蛋白凝胶比琼脂凝胶的培养效率好？

A：    请让我简单地说明琼脂培养法和胶原蛋白凝胶培养法的差异。

          被包埋在胶原蛋白凝胶内的细胞，在胶原蛋白基质上以贴壁的状态进行增殖。         .

          可是，被琼脂包埋的细胞，在琼脂基质上以未贴壁状态进行增殖。所以，贴壁依赖性细胞在胶原蛋白凝胶中

          进行细胞增殖，在琼脂内不进行细胞增殖。

          有报告指出：贴壁依赖性比较低的癌细胞，采用胶原蛋白凝胶培养法比采用琼脂培养法，显示高倍数的克隆

          形成率。

          有众多报告指出：胶原蛋白凝胶法对细胞增殖、细胞分化的诱导、形态形成等有效。

          关于胶原蛋白凝胶培养法的详细报告，请参考主页的论文介绍。

 

 

Q：    胶原蛋白凝胶包埋培养法和胶原蛋白、涂层培养法，有什么不同？

A：    胶原蛋白凝胶包埋培养法是在胶原蛋白凝胶内做细胞包埋，进行细胞培养的方法。

          被包埋到胶原蛋白内的细胞，和体内一样进行三维增殖。

          胶原蛋白涂层培养法是在培养皿上做胶原蛋白薄涂层，然后再上面进行细胞培养的方法，细胞呈单层增殖。

          综上所述，胶原蛋白凝胶包埋培养法是作为细胞外基质，利用胶原蛋白的三维培养法：胶原蛋白涂层培养法

          是利用胶原蛋白作为细胞吸附因子的二维培养法（单层培养法）。

 

  

Q：    想进行胶原蛋白凝胶培养发，应该选哪种Cellmatrix才好？

A：    请选Cellmatrix Type I-A。还有为初学者准备的，含有制作胶原蛋白凝胶全部试剂的胶原蛋白凝胶培养试剂

          盒。

          建议第一次使用的人购买这个胶原蛋白凝胶培养试剂盒。

 

 

Q：    想进行胶原蛋白、涂层培养防法，应该选哪种Cellmatrix才好？

A：    请选Cellmatrix Type I-C。Cellmatrix Type I-C具有低粘度，处理容易，最适合标准胶原蛋白涂层培养法。

          根据细胞种类和培养条件的不同，也能得到更好的适合细胞的胶原蛋白涂层。

          例如，表面细胞可使用Cellmatrix Type IV胶原蛋白等。请进行实验研讨。

  

 

Q：    想学习胶原蛋白培养法，请介绍合适的论文。

A：    详细请参考在线手册。

          该手册详细地介绍了：所谓的胶原蛋白是什么、胶原蛋白培养法的效果、胶原蛋白培养发的具体方法等。

          关于论文，请参考主页的论文介绍项目。

  

 

Q：    请具体地告知胶原蛋白、凝胶包埋培养方法。

A：    将作为酸性溶液的胶原蛋白溶液Cellmatrix Type I-A调整成中性。

          调整后的胶原蛋白因为低温，保持着溶液状态，以这个状态将细胞悬浊液混合到胶原蛋白溶液中。之后江汉

          油田这个细胞的胶原蛋白溶液移到培养皿中，在37℃中加热，胶原蛋白以细胞包埋状态形成凝胶。

          关于详细 ，请参考在线手册。

 

 

Q：    请具体地告知胶原蛋白涂层的方法。

A：    将Cellmatrix Type I-C用稀盐酸（pH3.0，约10-3M）稀释10倍以上，放入培养皿中，在室温中静置

          30~60分钟。

          静置后，摄取胶原蛋白溶液，以常温、无菌状态干燥培养皿。干燥后，用PBS或培养液洗涤2次，加入细胞悬

          液，进行普通培养。

  

 

Q：    进行胶原蛋白涂层时，向培养皿注入多少量的胶原蛋白溶液才好？

A：    胶原蛋白溶液注入量为均匀覆盖培养皿底面即可。

          以1ml/10cm2比例为标准

 

Q：    Cellmatrix Type IV是否能进行包埋培养？

A：    单独使用Cellmatrix Type IV胶原蛋白不能进行包埋培养。众多胶原蛋白中只有I型胶原蛋白具有凝胶化能力。

          若想研究在包埋培养下的IV型胶原蛋白与细胞的互相作用，请混合I型胶原蛋白IV型胶原蛋白。Cellmatrix 

          Type I和Cellmatrix Type IV的混合比例，在1:2~2:1范围为好。

          混合比例与胶原蛋白凝胶强度的关系，请参考本公司手册<使用胶原蛋白的细胞培养法>。

  

 

Q：    所谓的胶原蛋白是不是培养基？

A：    胶原蛋白不是培养基。所谓的胶原蛋白是培养基的基质。

          胶原蛋白凝胶是在培养基中作为整体结构支撑体的胶原蛋白组织，相当于生物体中的血液。

          在体外的细胞作为胶原蛋白的细胞外基质存在。

          将胶原蛋白作为培养基质使用的胶原蛋白凝胶包埋培养，旨在重现生物内环境的状态。

  

 

Q：    请告知胶原蛋白的稀释方法。

A：    用pH3.0稀盐酸稀释。因为胶原蛋白具有高粘性，使用像试管一样的细小容器比较难稀释，使用三角烧瓶或离

          心管（例如：50mL培养用塑料离心管等）等粗的容器比较容易稀释。

          三角烧瓶，像画圆一样摇晃10次左右：离心管，来回颠倒10次左右，进行搅拌稀释。如果，出现起泡，可静

          置一晚后使用，或以低速离心分离（1500rpm，3min）脱气后使用。

          同时，开发了胶原蛋白、涂层培养用低粘度型的Cellmatrix Type I-C。可一起讨论。

  

 

Q：    pH3.0盐酸是多少摩尔值？请告知制作方法。

A：    pH盐酸是10-3摩尔/升。因为盐酸是强酸，浓度基本合适，调整好pH仪表，早可快递、正确地制作。

          例如，一边用pH仪表测量，一边用巴斯德移液管一滴一滴向100mL蒸馏水中加入1N的盐酸。

          pH3.0盐酸制成后，请以高压灭菌或过滤灭菌。